[发明专利]一种牛口涎酶粗品的制备方法

说明书

技术领域：

本发明属于生化试剂酶技术领域，它解决了目前没有牛口涎酶制品的问题。具体涉及一种牛口涎酶粗品的制备方法。

背景技术：

目前，我国对牛口涎成分、作用机理研究的很少，还没有关于牛口涎酶制品的发明专利。据资料表明：唾涎是由遍布口腔粘膜深处的许多大大小小的唾涎腺分泌出来的。大的唾液现有三对：腮腺、颌下腺、舌下腺，小的有唇腺、舌腺、颊腺、腭腺等。唾涎95％以上是水分，还有动物健康必需的淀粉酶、溶菌酶、过氧化酶、过氧化氢酶、粘蛋白、球蛋白、肾上腺皮质激素、高血糖、维生素C、氨基酸、磷酸钙、钾、钠、钙、镁、氯等多种成分。唾涎淀粉酶是三大唾液腺中腮腺所分泌的一种水解的酶类，其主要作用是分解淀粉，使淀粉链中α-1，4葡萄糖苷键水解，生成麦芽糖，麦芽丙糖和糊精混合物，因而，唾液淀粉酶是消化代谢过程中必不可少的酶类；唾液还有可以清除口腔中食物残渣和异物，保持口腔的清洁；唾涎具有抗菌和凝血的作用，如口腔里的伤口往往比其它地方好得快，主要原因在于唾涎中的溶菌酶有杀菌的能力，可阻止口腔内细菌的大量繁殖；唾涎中的过氧化物酶、过氧化氢酶和维生素C等具有抗癌能力，能过消除致癌物质的毒性。

牛口涎酶的功效：牛口涎酶是可能是一种复合酶，它含有α-1，4淀粉酶，还可能含有蛋白酶、纤维素酶、溶菌酶、过氧化物酶及过氧化氢酶等等。中医认为牛口涎的功能是治噎膈，反胃呕吐；外用可治疣目，目睛损伤等症。

发明内容：

本发明牛口涎酶粗品的制备方法解决了目前没有牛口涎酶制品的问题，其产品便于生化研究和生物制品的应用。

本发明的技术方案如下：

一种牛口涎酶粗品的制备方法，其特征在于，它是由以下的制备方法获得的。

1、实验动物：长春市奋进乡5头黄牛，身体健康，检疫合格。

2、牛口涎采收和储藏：牛口涎为牛科动物黄牛或水牛的唾涎。以水洗牛口，从试验牛的口腔中拉出舌头，涂抹少放食盐或生姜，稍候接取自然流出口腔外的唾涎，用塑料袋收集，鲜用或冷藏。

3、粗酶提取方法：制备条件是牛口涎酶制备温度小于10℃，将收集的牛口涎用40目筛网过滤，去杂质，取滤液，在搅拌下加5mol/L HCl，调pH值为4-5，加0.6mol/L ZnCl₂适量，再用5mol/LNaOH在搅拌下调pH值为8-9，离心或过滤，弃上清液或滤液，取沉淀，采用自然风干或小于40℃低温干燥法(气流干燥、冷冻干燥)，水分小于16％，即得牛口涎酶粗品。

4、蛋白质含量测定法：采用考马斯亮蓝法(Bradford法)。

5、唾涎淀粉酶活性的测定：按崔福生《医学生化检测手册》天津：天津科学技术出版社，1982，785-795记载的方法进行唾涎淀粉酶活性的测定。

6、工艺流程：

验验无病的牛口涎→制备条件是牛口涎温度小于10℃→用40目筛网过滤→弃杂质→留滤液→在搅拌下加5mol/L HCl，调pH值为4-5→加牛口涎体积的三分之一的0.6mol/L ZnCl₂→用5mol/L NaOH在搅拌下调pH值为8-9→离心或过滤→弃上清液或滤液→取沉淀→用自然风干或小于40℃低温干燥法(气流干燥、冷冻干燥)，水分小于16％→包装即得牛口涎酶粗品，4℃冷藏保存。

7、技术要点：

(1)牛口涎原料验收：试验动物必须经过严格检验，来源于非疫区、无疾病牛的牛口涎。制备条件是牛口涎温度小于10℃。

(2)去杂质：用40目筛网过滤，弃杂质，留滤液。

(3)调酸性：在搅拌下加5mol/L HCl，调pH值为4-5，便于下面的ZnCl₂更好溶解。

(4)中性盐沉淀：加牛口涎体积的三分之一的0.6mol/L ZnCl₂使牛口涎中的酶和蛋白质沉淀。选择氯化锌是因为用量少、盐析作用强、对粗酶的使用无毒副作用及不良影响。

(5)调碱性：用5mol/L NaOH调pH值8-9是从沉淀和产品含量考虑。一方面pH越高越有利于沉淀，另一方面牛口涎中的中性蛋白酶在pH值7处对牛口涎中各种酶和蛋白质分解越大，还有pH值太低与太高都不有利于牛口涎酶的稳定。

(6)离心或过滤：离心方法是离心机转速大于4000转/分，过滤方法可采用真空过滤、加压过滤或常压过滤，弃上清液或滤液，取沉淀。

(7)干燥：用自然风干或小于40℃低温干燥法(气流干燥、冷冻干燥)，水分小于16％。