[发明专利]抗日本血吸虫可溶性虫卵抗原的鸡卵黄抗体及其制备和应用

权利要求书

1.一种抗日本血吸虫虫卵可溶性抗原SEA的鸡卵黄抗体，其特征在于，它是用血吸虫的特异性抗原以注射的方法免疫母鸡后，从被免疫母鸡的鸡蛋黄中提取的特异性免疫球蛋白免疫球蛋白IgY。

2.制备抗日本血吸虫虫卵可溶性抗原SEA的鸡卵黄免疫球蛋白IgY的方法，包括以下步骤：

(1)制备日本血吸虫虫卵可溶性抗原SEA；

(2)用日本血吸虫虫卵可溶性抗原SEA免疫母鸡，并收集鸡蛋；

(3)从被免疫母鸡的鸡蛋黄中提取、纯化特异性IgY。

3.根据权利要求2所述的制备日本血吸虫虫卵可溶性抗原SEA的鸡卵黄免疫球蛋白IgY的方法，其特征在于所述的日本血吸虫虫卵可溶性抗原SEA的制备方法是：将感染日本血吸虫的钉螺在25℃，光照充分的情况下逸出尾蚴，将至少20只钉螺逸出的尾蚴混合，经皮肤感染清洁级新西兰大白兔，感染量为800条尾蚴/兔，感染45天后麻醉感染的兔，生理盐水心脏灌注，然后剖杀并取出肝脏，分离并收集肝脏虫卯。将收集的虫卵在冰浴中反复匀浆后，4℃沉淀48h，10000×g离心1h，吸取上清，收集分装，即为虫卵可溶性抗原SEA。

4.根据权利要求2所述的制备日本血吸虫虫卵可溶性抗原SEA的鸡卵黄免疫球蛋白IgY的方法，其特征在于所述的用日本血吸虫虫卵可溶性抗原SEA免疫母鸡的方法是：将60μg/ml的SEA0.5ml与等体积的完全福氏佐剂混合，充分乳化后经翅膀下静脉免疫。首次免疫后10d，改用抗原加不完全福氏佐剂经鸡背部皮下加强免疫3次，免疫剂量为30μg SEA/只，每次间隔10d。自首次免疫后7d起收集鸡蛋，做好标记于4℃冰箱保存。

5.根据权利要求2所述的制备日本血吸虫虫卵可溶性抗原SEA的鸡卵黄免疫球蛋白IgY的方法，其特征在于所述的从被免疫母鸡的鸡蛋黄中提取、纯化特异性IgY的方法是：取初次免疫后60d的鸡蛋，去除蛋壳，用去离子水洗去卵黄外面的蛋清。去掉卵黄衣膜，将卵黄与两倍体积的0.01mol/L pH 7.6的磷酸盐缓冲液(Phosphate Buffer Solution，PBS)混合，并充分搅拌。加聚乙二醇6000(PEG 6000)至最终浓度为5％，并搅拌至PEG完全溶解。4420×g室温离心20min，将上清液过滤，继续加PEG至其浓度为20％，充分搅拌溶解后12,000×g室温离心10min。去掉上清液，用1/6的原卵黄体积的PBS重新溶解沉淀，蒸馏水中4℃透析2h，其间换水3～4次。最后置PEG中浓缩至原体积的1/10，收集浓缩后的IgY，分装后置-20℃保存备用。

6.一种体外检测血吸虫循环抗原的方法，其特征在于，以权利要求1所述的抗日本血吸虫可溶性虫卵抗原的鸡卵黄抗体接触待测血清。

7.一种检测血吸虫抗原的试剂盒，包括：

(1)已用抗SEA的IgY包被的96孔酶联板两块；

(2)以非血吸虫疫区健康人血清制备的冻干标准品1瓶0.5mg；

(3)样品稀释液0.01mol/l pH 7.4的磷酸盐缓冲液1瓶15ml；

(4)检测用抗体辣根过氧化酶标记抗SEA单克隆抗体1瓶：25ml

(5)洗涤液0.05％pH 7.4的磷酸盐缓冲液-吐温201瓶：500ml

(6)底物溶液四甲基联苯胺1瓶：20ml

(7)终止液2mol/l硫酸1瓶：20ml

(8)操作说明书。