[发明专利]使用量子点改进聚合酶链式反应的方法无效
申请号: | 200810048422.0 | 申请日: | 2008-07-17 |
公开(公告)号: | CN101372704A | 公开(公告)日: | 2009-02-25 |
发明(设计)人: | 李立家;马璐;何世斌 | 申请(专利权)人: | 武汉大学 |
主分类号: | C12P19/34 | 分类号: | C12P19/34;C12Q1/68 |
代理公司: | 武汉宇晨专利事务所 | 代理人: | 王敏锋 |
地址: | 43007*** | 国省代码: | 湖北;42 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 使用 量子 改进 聚合 链式反应 方法 | ||
1.一种使用量子点改进聚合酶链式反应的方法,其步骤是:
A、量子点的准备:量子点为水溶性,粒径大小为6-50nm,所述量子点为 半导体纳米微颗粒;
所述量子点为武汉珈源量子点技术开发有限公司的产品型号为W-3001-1的 水溶性量子点或Invitrogen公司的产品型号为Q10141MP的水溶性量子点;
B、聚合酶链式反应体系的优化:将20-30nM的量子点加入PCR反应体系当 中进行PCR扩增;
设定如下:
首先模板94℃变性4分钟;接着25-35个循环,每个循环包括:94℃变 性30秒,25-65℃退火30秒到1分钟,72℃延伸30秒到15分钟,循环次数、 退火温度25-65℃、退火时间30秒到1分钟、延伸时间30秒到15分钟,根据 待扩增对象的长度和引物P1、P2、P3、P4不同;最后72℃延伸10分钟;
C、PCR产物的检测:对扩增后的DNA样品进行琼脂糖凝胶电泳,检查扩增 条带,与对照体系进行比较;
D、量子点从反应体系中分离并回收扩增得到的PCR产物:对反应结束体系 进行离心,量子点被离心到底部,取上清得到所需PCR产物;
所述的模板为:玉米基因组DNA;
所述的引物为P1:5’-GTGCGATCATACCAGCRYTAATGAACCGG-3’;
所述的引物为P2:5’-GAGGTGCAACACGAGGACTTCCCAGGAGG-3’;
所述的引物为P3:5’-GGCCTTCAGAGACGAGGTTG-3’;
所述的引物为P4:5’-GCTGTGCATCAGGAATAATTTG-3’。
2.根据权利要求1所述的一种使用量子点改进聚合酶链式反应反应的方法, 其特征在于:所述的聚合酶链式反应体系包括脱氧核糖核苷酸、耐热DNA聚合酶、 引物、模板DNA和缓冲液,聚合酶链式反应反应液的体系是25uL。
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