[发明专利]一种唾液乙醇含量检测试剂

说明书

技术领域

本发明涉及临床检测技术领域，具体涉及一种唾液乙醇含量检测试剂。

背景技术

近年来，酒后引起的刑事案件和酒后驾车引起的交通事故案件不断上升。目前，许多国家都制定了血液中乙醇浓度与交通事故责任认定的关系，建立了多种能够检测血液中乙醇含量的方法。如GM/MS等仪器检测乙醇成分，虽然这些方法可以准确定量，但是存在着购买仪器价格昂贵，检测成本高，需专门培训，无法在案发现场快速检测的缺点。呼气式乙醇测定仪可以在现场使用，但是价格也十分昂贵，而且不卫生，容易发生交叉感染疾病。

大量的研究表明，人体在摄入酒精后唾液和血液中的酒精浓度几乎相等，血液/唾液的比值大约是1.07。在酶学反应的基础上，唾液乙醇检测试剂条可以用来检测唾液中的酒精含量，间接可以反映血液中的酒精的浓度。其方法适合在现场使用。

目前，根据唾液和血液中乙醇含量一致性的实验基础，唾液中乙醇含量检测试剂已经开发成功并投入使用，但是，根据文献查阅的结果和市场调查中发现，大部分唾液中乙醇含量检测试剂都是利用乙醇氧化酶催化酒精释放过氧化氢，再通过辣根过氧化物酶催化底物TMB(N，N，N’，N’-四甲基联苯胺)显色反应。这些技术和制作工艺在很多专利和文献中都有描述，例如：

中国专利申请03128880.4公开了一种应用玻化技术生产定量检测唾液乙醇传感器用双酶试条，其配方为：缓冲系统用量0.5～0.8M，pH值6.5～8.0；表面活性剂是丁二酸二辛酯磺酸钠(AOT)，用量0.1％～0.3％(v/v)；乙醇氧化酶(AOD)活化剂是叠氮化钠(NaN₃)，用量0.05％～0.10％(w/v)；还原剂用量0.01％～0.10％(w/v)；稳定剂是VI型玻化载体，由山梨醇、明胶、右旋糖苷和植物种子粗提液组成，用量5％～15％(w/v)；显色剂用量1.0％～2.5％(w/v)；显色剂溶剂是二甲苯原液；助染剂是褚红染料，用量0.5％～1.5％(w/v)；乙醇氧化酶用量30～45u/ml；过氧化物酶采用辣根过氧化物酶(HRP)，用量450～650u/ml。

中国专利申请200510013235.5公开了一种制备检测唾液酒精含量试纸的方法，选取纯棉浆滤纸，做试纸的底物载体，应用固相或半固相化学技术，将四甲基联苯胺、磷酸盐缓冲液、辣根过氧化物酶及乙醇氧化酶和牛血清白蛋白依次加入各试剂到试纸上，分步真空干燥。

中国专利200520025467.8公开了一种检测唾液酒精含量的试纸，包括具有试剂物的试纸本体和承载该试纸本体的支持体，其中，所述的试纸本体由内之外依次形成如下试纸层：真空干燥固化的3，3’，5，5’-四甲基联苯胺试纸层、真空干燥固化的磷酸盐缓冲液试纸层、真空干燥固化的辣根过氧化物酶试纸层、真空干燥固化的乙醇氧化酶和牛血清白蛋白试纸层。

中国专利申请200610029610.X公开了一种检测唾液中乙醇含量的试剂条和试剂盒，通过试剂条中乙醇氧化酶、过氧化物酶将N，N，N’，N’-四甲基联苯胺氧化后颜色改变的深浅，半定量地检测唾液中乙醇的含量。该方法简便、易携带，灵敏度高、反应速度快、稳定性高，尤其适合现场检测。

这些专利都是集中在如何用干化学试纸法准确的测定样品中乙醇和含量，以及如何将乙醇氧化酶进行固化，但是却忽视了几个关键的技术问题：1)乙醇氧化酶的专一性较差，对大多数醇类如甲醇、异丙醇等非乙醇物质也具有很强的氧化作用，在检测过程中这些物质具有很大的干扰作用。2)乙醇氧化酶极不稳定，其活性难以长期保持的特点，导致了目前该产品的稳定性差异大，3)反应体系中的过氧化氢和TMB的显色反应，容易受到一些还原性物质如抗坏血酸(维生素C)的干扰，4)目前的乙醇检测试剂条的显色底物是TMB(N，N，N’，N’-四甲基联苯胺)，是辣根过氧化物酶的最常用底物，但是它很难溶于水，在目前制备乙醇检测试剂过程中，底物TMB是用二甲苯来溶解，然后通过挥发作用除去有机溶剂，如果挥发不彻底，无疑是对健康有害的。另外，底物TMB极不稳定，需避光保存，容易被其他氧化剂氧化而变色，导致唾液乙醇检测试剂的长时间保存后出现蓝色本底，对检测结果产生干扰。在制备检测试纸的过程中，先将乙醇氧化酶干燥于试纸上，在加上TMB二甲苯溶液进行二次干燥过程。二次干燥对于温度敏感的乙醇氧化酶的活性影响甚大，同时，有机溶剂二甲苯对于乙醇氧化酶和辣根过氧化物酶的活性也有不同程度的抑制作用，导致产品的活性参差不齐。

发明内容