[发明专利]一种小干扰RNA在制备治疗大肠癌的药物中的应用

说明书

技术领域：

本发明涉及生物医药领域，尤其涉及一种治疗肿瘤的药物，特别是一种小干扰RNA在制备治疗大肠癌的药物中的应用。

背景技术：

随着人们生活水平的提高和饮食结构的变化，大肠癌在我国的发病率呈增高趋势，因此，探索有效的大肠癌防治策略是关乎国民健康的重要课题。但由于大肠癌发生发展的机制尚不明确，故缺乏有效的防治靶点及手段。尤其是中晚期大肠癌，其治疗手段只能以化疗为主，疗效以及患者预后均较差。

哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin，mTOR)介导的信号通路是与细胞增殖和凋亡最密切相关的通路之一，因其处于生长调节的中心环节而倍受关注。新近研究表明，肺癌、肾癌、乳腺癌和白血病等多种肿瘤均存在mTOR信号通路的过度激活；在肝癌、胰腺癌等消化系肿瘤中亦存在mTOR的高表达和持续活化；I期和II期临床研究显示，雷帕霉素的衍生物如CCI-779(Temsirolimus)、RAD001(Everolimus)以及AP23573等对晚期肾细胞癌及乳腺癌具有一定的抑制作用。但是目前关于mTOR信号通路与大肠癌发生发展的关系尚无文献报道，抑制mTOR信号通路是否可以防治大肠癌尚不知晓。

近十年来生物学最重要的进展莫过于RNA干扰(RNAi)现象的发现。已有研究表明，应用RNAi技术能够在哺乳动物中灭活或降低特异性基因的表达，产生类似基因敲除的效应。作为HIV相关淋巴瘤、AMD(age relatedmacular degeneration)等人类疾病的可能治疗手段，RNAi相关研究已进入I期和II期临床试验。这无疑也为实体肿瘤的治疗开辟了新途径。目前，肿瘤治疗领域的RNAi研究蓬勃开展，其中为数甚众者将与肿瘤发生发展密切相关的信号转导通路中的各级分子作为静默靶点的候选。

哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin，mTOR)基因，GeneID 2475，NM_004958，定位于染色体1p36.2，编码蛋白质分子量为289kDa，为不典型的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶，属于PIKK家族(PtdIns3K-related kinase family)。

RNA干扰技术(RNAi)是把与内源mRNA编码区同源的小片段外源双链RNA导入细胞中，导致特定基因沉默的一种技术。siRNA是RNAi的关键效应分子，是长度为21-23nt的双链RNA。

发明内容：

本发明的目的在于提供一种小干扰RNA在制备治疗大肠癌的药物中的应用，所述的这种小干扰RNA要解决现有技术中采用化疗来治疗中晚期大肠癌，其疗效以及患者预后均较差的技术问题。

本发明提供了一种小干扰RNA在制备治疗大肠癌的药物中的应用，所述的小干扰RNA正义链的5’→3’方向的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示，所述的小干扰RNA反义链的5’→3’方向的核苷酸序列如SEQ IDNO：2所示。

本发明还提供了一种小干扰RNA在制备治疗大肠癌的药物中的应用，所述的小干扰RNA的正义链5’→3’方向的核苷酸序列如SEQ IDNO：3所示，所述的小干扰RNA的反义链5’→3’方向的核苷酸序列如SEQ ID NO：4所示。

本发明还提供了一种小干扰RNA在制备治疗大肠癌的药物中的应用，所述的小干扰RNA的正义链5’→3’方向的核苷酸序列如SEQ IDNO：5所示，所述的小干扰RNA的反义链5’→3’方向的核苷酸序列如SEQ ID NO：6所示。

本发明还提供了一种小干扰RNA在制备治疗大肠癌的药物中的应用，所述的小干扰RNA的正义链5’→3’方向的核苷酸序列如SEQ ID NO：7所示，所述的小干扰RNA的反义链5’→3’方向的核苷酸序列如SEQ IDNO：8所示。

本发明使用了针对mTOR基因的4对siRNA片段，由美国Dharmacon公司合成(Pre-designed RNAi Reagents，Dharmacon，USA)，碱基序列及分子量如下表所示。经实验证实均为有效序列，均可抑制mTOR基因及蛋白表达，其中以siRNA3的作用最为显著。

mTOR siRNA1-4寡核苷酸序列及分子量