[发明专利]制备高纯度泽拉木醛的方法

说明书

技术领域

本发明涉及从南蛇藤植物中分离得到高纯度泽拉木醛的方法，尤其涉及用高速逆流色谱法(HSCCC)从南蛇藤植物中分离得到高纯度泽拉木醛的方法。 

背景技术

南蛇藤(Celastrus orbiculatus Thumb)是我国民间常用的一种植物药，有驱风除湿，活血解毒消肿功效，主治筋骨疼痛，四肢麻木，风湿性关节炎，腰腿痛，闭经，小儿惊风，痧症，痢疾，肿毒，跌打损伤(守立人.现代中药学大辞典(下册)[M].北京：人民卫生出版社.2001.1457)。南蛇藤主要药用成分有倍半萜及倍半萜衍生物、生物碱、三萜、黄酮等四类物质，其中三萜类成分主要存在于南蛇藤属植物的根皮中，主要类型有羽扇豆烷型和齐墩果酸型。泽拉木醛(Zeylasteral)是药理活性很强的五环三萜类化合物。 

泽拉木醛有抗菌活性，报道有抗革兰氏阳性菌、Candida albicans菌、Bacillus subtilis菌等的活性(de León L，Beltrán B，Moujir L.Antimicrobialactivity of 6-oxophenolic triterpenoids.Mode of action against Bacillussubtilis.Planta Med[J].2005 Apr；71(4)：313-9)。 

泽拉木醛药理活性显著，但其在自然界中存在量不多，少有报道分离得到此化合物，而且其易混杂杂质，因此至今有大量研究人员正在探索理想的分离纯化方法。 

文献报道了用柱层析方法得到泽拉木醛单体的方法(Gamlath，C；Studies on terpenoids and steroids.Part 10.Structures of four new naturalphenolic D：A-friedo-24-noroleanane triterpenoids.J Chem Soc，Perkin Trans1 1987，2849)：从卫矛科植物kokoona zeylanica植物茎表皮，分别用热石油醚和热苯溶剂提取后浓缩，石油醚部位经过柱层析后得到泽拉木醛。但 该方法操作步骤繁琐，过程中损失大，从而回收率低。 

高速逆流色谱(High Speed Countercurrent Chromatography，简称HSCCC)是国际上于上世纪80年代以来在液-液分配色谱基础上发展起来的新型分离技术，其分离原理是利用螺旋柱在高速行星运动时产生的巨大离心力，使螺旋柱中互不相溶的两相不断混合，达到稳定的流体动力学平衡态，此时在螺旋柱中任何一部分，两相溶剂都反复进行着混合和静置的分配过程，这一过程频率极高，当柱心以800rpm旋转时，频率超过每秒13次。流动相不断地穿过固定相，同时保留其中的一相(固定相)，利用恒流泵连续输入另一相(流动相)，流动相载着溶质(样品)进入螺旋柱并不断反复穿过固定相，使样品在两相之间也不断反复地进行分配，由于样品中各组分在两相中分配系数不同，导致在螺旋柱中的移动速度不同，因而能使样品各组分按分配系数的次序，依次得到分离。 

高速逆流色谱作为一种新型的分离技术，有许多优点是传统液-固色谱无法比拟的，因而有很广阔的应用前景。首先，它的流动相、间定相均为液体，不需要固体载体，避免了液-固色谱常会造成的固体载体对样品的不可逆吸附，可以保证样品在不损失任何一种组分的情况下得到分离，理论上样品回收率相当高；其次，它的分离效率高，可以达到几千个理论塔板数，尤其在天然产物组分分离提取中有较高的分离度，有的样品经过一次分离就可以得到一个甚至多个单体，并且分离时间也短，一般是几个小时即可完成一次分离：此外，它使用常规试剂，有广泛的液-液分配体系可供选择，体系更换方便、快捷：它的进样量大，可以从毫克到克量级，进样体积可达20mL以上，这对于样品的纯化制备显示出惊人的优势。 

但欲用HSCCC进行成功的分离，选择适宜的溶剂系统非常重要。不同的溶剂系统，具有不同的上、下相之比，其粘度、极性、密度等性质相差甚远，对相同的成分具有不同的溶解、分配能力，形成分配系数的差异，对分离效果产生不同的影响。目前，溶剂体系的选择还没有一套完整的理论依据。另外，在选定了溶剂体系后，有时需要对四个仪器运行参数(温度、转速、流动相流速、进样体积)进行设定。 

发明内容