[发明专利]胃癌诊断试剂及其用途

说明书

技术领域

本发明涉及一种医药诊断技术领域，具体涉及一种胃癌诊断试剂及其应 用。

背景技术

胃癌是世界上最常见和致死的恶性肿瘤之一，也是我国最常见的恶性肿瘤 之一，占消化道恶性肿瘤死亡原因的第一位，有些地区占全部恶性肿瘤死亡 原因的首位，且胃癌发病率一直居高不下。有资料显示，我国每年新发胃癌 患者40万人，死亡人数30万人，且青年人患胃癌的比例在增加，15％患者 为40岁以下年轻人。胃癌的早期诊断是困难的，在大多数西方国家，5年存 活率低于20％。90％以上的胃癌是腺癌，通过Lauren分类可将它们分成 肠型和弥漫型。

目前绝大多数医院主要依赖于X线，B型超声、内窥镜检查以及活组织病 理学检查等对肿瘤进行诊断。以上检查有些对患者创伤较大，有些价格较为 昂贵，对仪器设备要求高，难以用于大规模肿瘤检查或健康体检。

癌症的早期检测和治疗能显著提高癌症患者的存活。以胃癌为例，诊断为 疾病早期的患者5年存活率为90％，而诊断为疾病晚期的患者5年存活 率约为10％。然而，绝大多数胃癌患者诊断时通常处于疾病晚期。因此， 开发胃癌早期诊断方法能够改善患者的预后。

在包括体液如血液、尿液、腹膜灌洗液和粪便提取物在内的生物标本中的 特异性癌症相关标记物的鉴定能提供有价值的癌症早期诊断方法，以便早期 治疗并改善预后。特异性癌症标记物还能提供用于监测疾病进展的方法，从 而能跟踪外科手术、放射治疗和化学治疗的功效。然而，对于许多主要癌症， 可利用的标记物缺乏足够的敏感性和特异性。例如，用于胃癌的最常用标记 物CA199、CA724和癌胚抗原(CEA)仅检测到大约15～50％的任何阶段 的胃肿瘤，对于疾病早期的检测则降至大约2～11％。因此，出现假阴性检 测的频率非常高，这导致患者丧失了治疗时机，而且使用这些标记物可能对 高达1/3的患有良性胃疾病个体给出假阳性信号，导致误诊。

发明内容

本发明所要解决的技术问题为克服现有的胃癌诊断试剂缺乏足够的敏感 性和特异性的问题，而提供一种敏感性和特异性较好的胃癌诊断试剂。

一种胃癌诊断试剂盒，包括固相、位于固相中的抗体、标记物偶联抗体， 其特征在于所述抗体为抗H2B组蛋白抗体。

在一实施方案里，本发明胃癌诊断试剂盒，包括固相、位于固相中的抗体、 生物素修饰的抗体以及标记物偶联的抗生物素蛋白，其特征在于所述抗体为 抗H2B组蛋白抗体。

在一实施方案里，本发明的胃癌诊断试剂盒，包括固相、位于固相中的抗 体、2，4-二硝基苯酚修饰的抗体以及标记物偶联的标记的抗2，4-二硝基 苯酚抗体，其特征在于所述抗体为抗H2B组蛋白抗体。

本发明的试剂盒，根据需要也可包含用于检测上述标记的抗生物素蛋白或 标记的2，4-二硝基苯酚抗体的试剂。

H2B组蛋白是构成真核细胞核小体的基本成分。核小体核心组蛋白有 H2A、H2B、H3和H4四种，它们形成的八聚体构成核心颗粒，DNA分子盘 绕在外。组蛋白N端尾部进化上极为保守，含有大量赖氨酸和精氨酸残基， 伸出核小体外，很容易受乙酰化酶、甲基化酶和激酶等作用发生修饰。组蛋 白通过翻译后修饰在细胞周期中引起染色质结构改变，从而参与基因表达调 控、肿瘤形成、细胞凋亡等重要生命过程。目前，国内外仅见一篇关于IPO-38 用于牙源性肿瘤增殖活性研究的报道【Oral Dis，2004，10(1)：22-6】，缺乏有 关该抗原本质的研究信息，极大地限制了其临床应用研究范围，同时存在对 IPO-38试剂依赖进口的局面。

在一些实施方案里，所述抗体可为多克隆抗体或单克隆抗体，其中优选 IPO-38单克隆抗体。

在一些实施方案里，所述标记物偶联抗体中标记物为酶、核素、荧光素。

所述酶选自过氧化物酶、β-D-半乳糖苷酶、碱性磷酸酶及6-磷酸葡糖脱 氢酶。

在实施方式里，所述标记物为酶时，本发明试剂盒还包括辅助试剂，包括 酶联反应底物溶液、显色液、反应终止液和清洗缓冲液。

一种辅助试剂配制方法如下：

1.底物溶液：磷酸-柠檬酸缓冲液(pH5.0)配制的3％H₂O₂。

2.显色液：0.1mg/ml TMB甲醇溶液.

3.反应终止液：2M硫酸。

4.清洗缓冲液：PBS溶液。