[发明专利]一种乙肝多肽疫苗及其应用

说明书

【技术领域】

本发明涉及多肽疫苗领域，具体地说是一种具有治疗性作用的乙型肝炎多肽疫苗，本发明还涉及该疫苗作为治疗乙肝的药物制剂的应用。

【背景技术】

乙型肝炎病毒是一种具有很强传染性的病毒，全球目前约有3亿5千万人口感染乙型肝炎病毒，每年大约有1百万感染者死于乙型肝炎及由乙型肝炎诱发的肝硬化，肝坏死和肝癌。乙型肝炎可以分为急性及慢性两种，95％左右急性乙肝患者可以通过治疗而痊愈；5％左右转变成慢性乙型肝炎。绝大多数的慢性乙肝患者成为终生病毒携带者。

中国是世界上罹患慢性乙肝最严重的国家。全国乙肝病毒表面抗原(HBsAg)携带率平均10％(表面抗原携带者约1亿人)。全国人群乙型肝炎感染率高达60％(约有6亿多人已被乙肝病毒感染过)。若不及时有效地清除乙型肝炎病毒(HBV)，约25％的乙肝病毒携带者会发展为肝硬化，5-10％的患者会演变成肝癌。目前人们对乙型病毒性肝炎主要采取预防手段，即接种乙型肝炎疫苗进行预防。预防疫苗主要用于从未感染过的机体，因此天然结构的病毒蛋白可直接作为疫苗抗原。但是已经开发出应用的乙型肝炎病毒疫苗，虽然能对HBV感染起到良好的预防作用，但对感染HBV的机体，却难以发挥治疗和清除病毒的作用。主要原因在于机体对乙肝病毒产生了特异性免疫耐受，免疫系统不能有效地清除病毒。世界范围内对乙肝特别是无症状病毒携带者和慢性乙肝患者，一直没有疗效确实及根治的方法，现有的干扰素等药物不仅价格昂贵，而且效率低，容易复发。

近年来，随着体外大量培养病毒技术、同位素标记技术和对病毒及亚结构分析和纯化方法的发展，人们对病毒结构的认识日趋丰富。与此同时，将病毒分解成各有效生物活性成分的方法也已出现。人们发现一些含类脂病毒(如流感病毒、麻疹病毒和水泡性口炎病毒等)的表面成分或其蛋白的一部分肽段，在免疫动物后会产生一定的保护性免疫。同时，蛋白质分析方法及免疫学都有了长足的发展，这些新方法使我们可以迅速而又准确地确定病原体中可诱导免疫应答的蛋白质及其片段，并产生了一种新疫苗-多肽表位疫苗。多肽表位疫苗就是在具有抗原性的蛋白中选取单一表位或者多个表位进行组合，搭配，因而可以在较小的分子中展现完整蛋白的免疫原性。合成多肽生产费用低且便于纯化，又不含诸如微生物培养物或其他病毒或白蛋白的残留物等生物成分。另一优点是多肽合成的重复性好，每批产品均可通过N端测序和氨基酸分析来控制。所以其结构简单，易于生产而且高效、高特异性的特点使之成为当今疫苗研发的热点。

多肽疫苗是目前研究领域内较受重视的研究方向之一。尤其是病毒多肽疫苗的研究取得了许多进展，结果令人鼓舞。1999年美国NIH公布了两种HIV-1病毒多肽疫苗，对人体进行的I期临床试验结果，证实两种多肽能刺激机体产生特异性抗体和特异性细胞免疫，并有较好的安全性。我国清华大学也证实HIV-I膜蛋白内一段多肽有很强的免疫原性。丙肝病毒多肽疫苗也显示有良好的发展前景，国外学者从丙肝病毒(HCV)外膜蛋白E2内筛选出一般多肽，它可刺激机体产生保护性抗体。其它病毒的多肽疫苗及抗肿瘤、避孕多肽疫苗的研究也取得了较大进展。

美国Scripps研究所的FV Chisari申请了四项美国专利，主要内容是关于在HBV抗原上所确定的分别来源于核心抗原、表面抗原、多聚酶和X抗原的CTL表位。目前国内文献所报道的以激活免疫系统为基础的乙肝多肽疫苗大都集中于选用HBV病毒的蛋白的天然序列。当前，对HBV慢性持续感染状态尚无根治的方法。如何打破机体慢性感染所形成的免疫耐受状态，治愈乙肝是抗HBV治疗研究的重要课题。

【发明内容】

本发明的目的就是为了克服目前乙肝疫苗的缺点，提供一种具有强细胞免疫原性可以作为治疗用的、不易产生HBV感染免疫耐受、使用安全的疫苗；同时，本发明还提供一种制备简单、易于构建、稳定性好的乙肝疫苗的制备方法，本发明还涉及这种乙肝疫苗作为治疗乙肝的药物制剂的应用。