[发明专利]快速检测呋喃妥因代谢物的胶体金层析试纸条的制备方法

说明书

技术领域

快速检测呋喃妥因代谢物的胶体金层析试纸条的制备方法，属于检测技术领域。

背景技术

硝基呋喃类抗生素(Nitrofuran antibiotics)主要是指呋喃唑酮(Furazolidone)，呋喃西林(Nitrofurazone)，呋喃妥因(Furantoin)和呋喃它酮(Furaltadone)，为一类广谱抗生素，对革兰阳性及阴性菌均有一定抗菌作用。呋喃妥因(Furantoin)，是一种人工合成的硝基呋喃类广谱抗菌药物，对多种革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌及某些原虫和真菌具有抑制或杀灭效果，而且药效稳定，在畜禽和水产养殖中得到了广泛的应用。硝基呋喃类药物及其对应的代谢产物有呋喃唑酮(AOZ)、呋喃它酮(AMOZ)、呋喃西林(SEM)和呋喃妥因(AHD)。硝基呋喃类药物在动物体内代谢很快，在组织中结合的代谢产物滞留时间长。动物服用呋喃类药物后，原药分子在动物体内迅速代谢，其在体内的稳定性不超过几小时；代谢的部分化合物分子与细胞膜蛋白结合成为结合态，结合态可长期保持稳定，从而延缓原药在体内的清除速度。而普通的食品加工方法(如烧烤、微波加工、烹调等)难以使蛋白结合态呋喃唑酮残留物大量降解，食用含有该残留物的肉制品会对人体产生一定的毒副作用。

硝基呋喃类药物对畜禽有一定毒性，同时硝基呋喃类药物也是一类具有潜在致癌和诱导有机体产生突变的物质。由于硝基呋喃类抗生素在体内代谢迅速，而代谢产物与蛋白结合形成稳定化合物，但这些代谢物可以在弱酸性条件下(如人类胃液的酸性条件)从蛋白质中释放出来，因此当人类吃了含有硝基呋喃类抗生素残留的食品，这些代谢物就可以在人类的胃液的酸性条件下从蛋白质中释放出来而被人体吸收，从而对人类健康造成严重的危害。

1990年7月欧盟颁布2377/90/EEC条例，将硝基呋喃类药物及其代谢产物列为A类禁用药物。自1995年起欧盟全面规定禁止使用呋喃类抗菌物质，在动物源性食品中呋喃类残留物的检出限为不得检出。欧盟(EU)从1997年开始将所有的硝基呋喃类抗生素全部列为违禁药物。2004年美国FDA公布了禁止在进口动物源性食品中使用的11种药物名单，其中包括呋喃妥因和呋喃唑酮。我国农业部文件农牧发[2002]1号也规定动物源性食品中呋喃唑酮的检出限为不得检出。目前国内外都对呋喃类物质的控制相当严格，各国对于测定的标准都有明确的规定。尽管如此，但是由于其药效确切，价格低廉，目前在畜牧和水产养殖中违禁使用现象仍较严重。

由于呋喃类药物在动物体内快速代谢，代谢物与组织蛋白结合物在体内滞留时间长，因此检测呋喃类药物残留的最佳方法是检测其代谢物而非检测原药。

目前，检测呋喃妥因代谢物(AHD)的方法主要有仪器分析法和酶联免疫分析法(ELISA)。仪器分析法主要是有高效液相色谱(HPLC)、液相色谱-质谱法(LC-MS)、液相色谱一串联质谱法(LC-MS/MS)。仪器分析法灵敏度高，结果准确，但是样品需经一系列复杂的处理净化，繁琐费时，所需仪器设备价格昂贵，而且只有特定的专业技术人员才能操作，不能进行现场检测，时效性差，难以推广。ELISA法以竞争性酶联免疫反应为检测原理，缩短了检测时间，可以定性定量检测。但ELISA方法需要配套的酶标仪和配套试剂，操作过程仍较复杂，而且国内现处在研发阶段，进口国外产品价格昂贵，因而ELISA方法的应用受到了较大限制。

发明内容

本发明的目的：针对现有检测呋喃妥因代谢物AHD的技术的不足和缺限，提供一种快速检测呋喃妥因代谢物的金标层析试纸条的制备方法，使其能更加快速、灵敏、简便地检测呋喃妥因代谢物残留。

本发明的技术方案：一种呋喃妥因代谢物胶体金层析检测试纸条的制备方法，含有衬板和在衬板上依次衔接的样品垫、金标结合垫、包被膜、吸水垫，金标结合垫为吸附呋喃妥因代谢物AHD衍生物金标抗体的玻璃纤维棉，在包被膜上有用AHD衍生物偶联载体蛋白的溶液印制的直线式隐形检测线T线，用羊抗兔IgG溶液印制的直线式隐形控制线C线，两条线平行排列。

所述的衬板为不吸水的韧性材料，选用硬质塑胶条，或不吸水硬纸条；所述的样品垫选用玻璃纤维棉，或尼龙膜，或聚偏二氟乙烯膜，或聚酯膜；所述的吸水垫选用吸水能力较强的吸水滤纸或滤油纸；所述的包被膜选用硝酸纤维素膜或醋酸纤维素膜。

所述的AHD衍生物金标抗体为胶体金标记的AHD衍生物多克隆抗体；所述的偶联AHD衍生物的载体蛋白选用牛血清白蛋白BSA，或卵清蛋白OVA。

本发明的有益效果：本检测试纸条具有下列优点：