[发明专利]从蓝藻中快速分离纯化C－藻蓝蛋白和异藻蓝蛋白的方法

权利要求书

1、从蓝藻中快速分离纯化C-藻蓝蛋白和异藻蓝蛋白的方法，步骤如下：

(1)原料为蓝藻，采用液氮研磨的方法，使蓝藻解体溶解，离心去除细胞残渣，收集上清液得到C-藻蓝蛋白和异藻蓝蛋白粗提液；

(2)将步骤(1)的粗提液，用硫酸铵沉淀法，使C-藻蓝蛋白和异藻蓝蛋白从粗提液中沉淀出来，离心收集沉淀，再用pH5.8～6.0、20mM磷酸缓冲液溶解并透析，除去硫酸铵，即得C-藻蓝蛋白和异藻蓝蛋白溶液；

(3)将步骤(2)制得的C-藻蓝蛋白和异藻蓝蛋白溶液，用离子交换层析，并用具有恒定的离子强度、连续pH梯度的缓冲液进行洗脱，分别获得高纯度的C-藻蓝蛋白和异藻蓝蛋白。

2、如权利要求1所述的从蓝藻中快速分离纯化C-藻蓝蛋白和异藻蓝蛋白的方法，其特征在于，所述步骤(1)具体如下：

取新鲜的蓝藻，按重量体积比1∶1加入液氮研磨磨碎，然后按重量体积比1∶1加入0.02mol/L磷酸缓冲液(pH5.8～6.0)，溶解，4℃下，8000rpm～10000rpm离心10min～15min，上清液即为C-藻蓝蛋白和异藻蓝蛋白的粗提液。

3、如权利要求1所述的从蓝藻中快速分离纯化C-藻蓝蛋白和异藻蓝蛋白的方法，其特征在于，所述蓝藻为单细胞蓝藻，选自螺旋藻或集胞藻。

4、如权利要求1所述的从蓝藻中快速分离纯化C-藻蓝蛋白和异藻蓝蛋白的方法，其特征在于，所述步骤(2)具体操作为：向上述步骤(1)得到的C-藻蓝蛋白和异藻蓝蛋白粗提液中加入固体硫酸铵，至浓度为55～60％，重量体积比，放置5～6h，然后在4℃下，8000rpm～10000rpm离心10min～15min，取沉淀，并将沉淀溶于pH5.8～6.0的20mM的磷酸缓冲液中，将溶有沉淀的磷酸缓冲液进行透析，透析液即为C-藻蓝蛋白和异藻蓝蛋白溶液。

5、如权利要求1所述的从蓝藻中快速分离纯化C-藻蓝蛋白和异藻蓝蛋白的方法，其特征在于，所述步骤(3)具体操作如下：

取步骤(2)制得的C-藻蓝蛋白和异藻蓝蛋白溶液1.5～2.5ml，上DEAE Sepharose FastFlow离子交换色谱柱，然后用pH5.6、含0.05mol/L NaCl的20mmol/L醋酸缓冲液洗脱，再用pH5.8、含0.05mol/L NaCl的20mmol/L醋酸缓冲液和pH4.0、含0.05mol/L NaCl的20mmol/L醋酸缓冲液各100mL进行梯度洗脱，洗脱速度为1～1.2mL/min，检测波长280nm，根据洗脱曲线分别收集C-藻蓝蛋白和异藻蓝蛋白，得到高纯度的C-藻蓝蛋白和异藻蓝蛋白。

6、如权利要求5所述的从蓝藻中快速分离纯化C-藻蓝蛋白和异藻蓝蛋白的方法，其特征在于，所述DEAE Sepharose Fast Flow离子交换色谱柱是经pH5.8、含0.05mol/L NaCl的20mmol/L醋酸缓冲液预先平衡的，规格为0.6×10cm。