[发明专利]具有可见光激发性能的纳米铕荧光微粒及其制备和应用

权利要求书

1.具有可见光激发性能的纳米铕荧光微粒，其特征在于：其是由氨基硅 烷化试剂与一种可见光激发的三元铕配合物于有机溶剂中发生共价键合反 应，得到荧光前驱体，然后其再与硅酸酯及带有活性基团氨基或巯基的硅 烷化单体发生共聚，形成具有可见光激发性能且可用于生物标记的功能性 纳米铕荧光微粒；

其中所述的可见光激发的三元铕配合物是由三价铕离子与四齿β-二酮 类配位体和2-(4-N，N-二乙基苯胺基)-4，6-二(3，5-二甲基吡唑基)-1，3，5-三嗪配 位体形成的三元荧光配合物，两种配位体的结构式为：

式中R为＝C₆F₅或脂肪烃类取代基C_nH_2n+1或C_nF_2n+1，其中n＝1、2、3、 4或5；

所述三价铕离子、四齿β-二酮类配位体及2-(4-N，N-二乙基苯胺基)-4，6- 二(3，5-二甲基吡唑基)-1，3，5-三嗪，它们之间的摩尔比例为1∶0.5～3∶0.5～ 3，并保持四齿β-二酮类配位体与氨基硅烷化试剂的摩尔比例为1∶1～4。

2.根据权利要求1所述的纳米铕荧光微粒，其特征在于：所述硅酸酯的 分子式为Si(OR)₄，其中的R是-C_nH_2n+1，n＝1～5。

3.根据权利要求1所述的纳米铕荧光微粒，其特征在于：所述氨基硅烷 化试剂及带有氨基的硅烷化单体均为3-氨基丙基三烷氧基硅或N-(β-氨乙 基)-γ-氨丙基三乙氧基硅，带有巯基的硅烷化单体为3-巯基丙基三烷氧基硅。

4.一种权利要求1所述的纳米铕荧光微粒的制备方法，其特征在于：

具体操作过程为，

1)荧光前躯体：在有机溶剂中，先将四齿β-二酮类配位体与氨基硅烷 化试剂在室温条件下搅拌0.5～4小时，使之发生共价结合反应，两者的摩 尔比例为1∶1～5，体系中四齿β-二酮类配位体的摩尔浓度为1～15 μmol/ml，然后再加入Eu³⁺和2-(4-N，N-二乙基苯胺基)-4，6-二(3，5-二甲基吡 唑基)-1，3，5-三嗪继续搅拌4～24小时，保持Eu³⁺、四齿β-二酮类配位体及 2-(4-N，N-二乙基苯胺基)-4，6-二(3，5-二甲基吡唑基)-1，3，5-三嗪的摩尔比例为 1∶0.5～3∶0.5～3，蒸发溶剂并干燥得到可见光激发的荧光前躯体；

2)配制微乳液：将有机溶剂、助表面活性剂、表面活性剂和水按摩尔 比为15～25∶2～7∶1∶6～10均匀混合后制成微乳液；

3)在微乳液中加入荧光前躯体，室温条件下搅拌0.5～1小时，然后加 入硅酸酯和带有活性基团氨基或巯基的硅烷化单体，用重量含量3-25％的 氨水引发聚合，搅拌下室温反应4～48小时，离心分离即可，从而制备出可 见光激发且具有生物标记功能的荧光纳米微粒；

荧光前躯体在微乳液体系中的浓度为0.05～1mg/ml；

硅酸酯与带有活性基团氨基或巯基的硅烷化单体的摩尔比为1∶0.05～ 0.2，硅酸酯在微乳液体系中的摩尔浓度为14～45μmol/ml；

所述有机溶剂为：苯、正己烷、环己烷或石油醚；助表面活性剂为乙 醇、丙醇、异丙醇、正己醇、乙二醇、正辛醇或正癸醇；表面活性剂为聚 氧乙烯基辛基苯基醚或聚氧乙烯基壬基苯基醚。

5.按照权利要求4所述的纳米铕荧光微粒的制备方法，其特征在于：

步骤1)和3)中所述氨基硅烷化试剂及带有氨基的硅烷化单体均为3- 氨基丙基三烷氧基硅或N-(β-氨乙基)-γ-氨丙基三乙氧基硅；

步骤3)中所述带有巯基的硅烷化单体为3-巯基丙基三烷氧基硅。

6.一种权利要求1所述纳米铕荧光颗粒作为生物标记物的应用，其特征 在于：所述纳米铕荧光颗粒作为纳米探针，利用时间分辨荧光测定方式进 行生化测定。

7.按照权利要求6所述的应用，其特征在于：所述时间分辨荧光测定方 式是指时间分辨荧光免疫测定法、时间分辨荧光DNA杂交测定法、时间分 辨荧光显微镜成像测定法、时间分辨荧光细胞活性测定法或时间分辨荧光 生物芯片测定法。