[发明专利]一种壳寡糖单体的分离纯化方法

说明书

技术领域

本发明涉及壳寡糖单一组分的分离纯化，具体地说是柱层析的方法分离壳寡糖的方法。

背景技术

壳寡糖是指β-1，4连接的，由2-10个2-氨基葡萄糖残基构成的低聚糖，它是目前发现的天然多糖中唯一带正电荷的小分子多糖，是甲壳素、壳聚糖系列产品的高级产品，具备水溶性好、生物活性高、功能作用大、应用领域广、易被人体吸收等突出特点，在国外素有人体第六大生命要素、软黄金之美誉，在医药、功能性食品、日化、农业等领域应用广泛。壳寡糖作为新世纪前瞻性生物技术产品，具备广泛的应用前景。

壳寡糖具有多种生理功能：激活免疫，增强吞噬细胞能力3-5倍；提高有益脂蛋白数量，降低血脂；改善胰岛素受体敏感性，明显减低空腹血糖；保护正常肝细胞的分泌、代谢和排泄功能，增强肝细胞的生物转换机能，直接抑制肝癌细胞及腹水肿瘤细胞的生长；促进双歧杆菌的增殖，抑制肠道有害菌的生长等。目前，壳寡糖以其稳定的三维结构和特殊的生物功能，成为令人关注的功能性物质。获得一定数量的寡糖单一成分对开发研究壳寡糖化学特性、生理功能、作用机理及检测技术等具有极大的帮助。

发明内容

壳寡糖是目前发现的天然多糖中唯一带正电荷的小分子多糖，并具有稳定的三维结构，特殊的生理活性，是高效的功能性物质。

本发明的目的在于为糖工程及相关领域的研究提供一种壳寡糖单体及分离纯化壳寡糖单体的方法，本发明分离效果好，收率高，所得到的壳寡糖单体纯度高。

为实现上述目的，本发明采用的技术方案为：

一种壳寡糖单体的分离纯化方法，按如下步骤进行操作：

1)壳寡糖溶液的配置：将壳寡糖以20-70％的质量浓度溶于水或0.1-1.0mol/L盐酸中，待完全溶解后，抽滤，滤液即为壳寡糖溶液；

2)将壳寡糖溶液上样于阳离子交换树脂柱(柱子内径55mm×柱高400mm)，用2.0-3.0mol/L的盐酸梯度洗脱，流速为100-600ml/h；

用自动部分收集器收集，每1小时收集一次；酸碱滴定法和HPLC法分别检测收集液的盐酸含量和糖含量，结合两者的检测结果，得出馏分11-17、盐酸浓度2.0-2.15mol/L时为壳二糖；馏分22-31、盐酸浓度2.2-2.35mol/L时为壳三糖；馏分34-45、盐酸浓度2.4-2.5mol/L时为壳四糖；馏分46-50、盐酸浓度2.55-2.7mol/L时为壳五糖；馏分52-62、盐酸浓度2.75-2.8mol/L时为壳六糖；馏分70-80、盐酸浓度2.9-3.0mol/L时为壳七糖；合并上述的单一组分；

3)把上述合并后的单一组分，浓缩得浓缩液，活性炭脱盐酸，浓缩，结晶，通过HPLC和MS检测，得到了纯度不同的各个单体。

相同规格的柱子，本研究所用的阳离子交换树脂承载量大，分离效果好，而且填料可以重复使用。壳寡糖与阳离子交换树脂的用量比例为10～80g∶800ml；

脱盐酸所用活性炭柱，浓缩液与活性炭的用量比例为5～20ml∶400ml。脱盐酸所用活性炭柱(柱子内径50mm×柱高300mm)，脱盐酸效果好，且对壳寡糖吸附少，收率高；本发明所用的活性炭脱色效果好，可以重复使用。

所述壳寡糖的脱乙酰度＞90％，聚合度2-10。

本发明所用的酸溶液为盐酸溶液，盐酸浓度为2.0-3.0mol/L，分离单体纯度高；且本发明分离得到的壳寡糖单体成盐酸盐形式，稳定、易保存。

本发明适合于分离2-10个2-氨基葡萄糖残基构成的低聚糖，分离效果好。

本发明的优点是：

本发明壳寡糖的分离纯化，主要是先用2.0-3.0mol/L盐酸溶液对壳寡糖进行初步分离，得到壳寡糖单体的酸溶液，然后脱盐酸，进行纯化，这样分离得到的壳寡糖单体纯度更高。

本发明所得到的壳寡糖单体纯度高，收率高，稳定，容易保存；分离方法成本低，操作简单、方便，技术路线成熟，所用的填料均可以重复使用。

具体实施方式

下面通过实施例对本发明的技术进一步说明

实施例1：