[发明专利]增强蛋白表达和纯化的方法和组合物

权利要求书

1.编码工程SUMO蛋白酶的分离的核酸分子，其中所述的工程 SUMO蛋白酶是酵母ULP1蛋白，其选自由以下组成的组：

a)SEQ ID NO∶3所示的酵母ULP1蛋白；

b)SEQ ID NO∶4所示的酵母ULP1蛋白；

c)SEQ ID NO∶76所示的酵母ULP1蛋白，其中氨基酸位点451的 天冬氨酸是丝氨酸并且455位的谷氨酸是丙氨酸；和

d)SEQ ID NO∶76所示的酵母ULP1蛋白，其中氨基酸位点451的 天冬氨酸是丝氨酸并且455位的谷氨酸是甲硫氨酸。

2.根据权利要求1的分离的核酸分子，其中所述的工程SUMO蛋 白酶如SEQ ID NO∶3或SEQ ID NO∶4所示。

3.权利要求1的核酸分子所编码的分离的工程SUMO蛋白酶。

4.产生所关心的蛋白的方法，包括：

i)可操作地连接编码工程SUMO的核酸至编码所述所关心的蛋白 的核酸序列上，从而生成编码融合蛋白的构建体，其中所述工程SUMO 是SEQ ID NO∶1所示的酵母Smt3蛋白；

ii)将所述的核酸导入宿主细胞，由此在所述融合蛋白中所述工程 SUMO的存在增加所述所关心的蛋白在所述宿主细胞中的表达水平；

iii)分离所述融合蛋白；和

iv)用权利要求3的工程SUMO蛋白酶切割所述融合蛋白，从而释 放所关心的蛋白。

5.根据权利要求4的方法，其中所述的宿主细胞是原核细胞。

6.根据权利要求5的方法，其中所述原核细胞是大肠杆菌。

7.根据权利要求4的方法，其中所述宿主细胞是真核细胞。

8.根据权利要求7的方法，其中所述真核细胞选自哺乳动物细胞、 酵母细胞和昆虫细胞。

9.在宿主细胞中产生所关心的蛋白中改变的氨基末端的方法，包 括：

a)提供编码所述所关心的蛋白的核酸序列；

b)在所述的核酸中改变N末端氨基酸编码序列；

c)可操作地连接编码工程SUMO的核酸至编码所述所关心的蛋白 的所述核酸序列上，其中所述工程SUMO是SEQ ID NO∶1所示的酵母 Smt3蛋白；

d)在宿主细胞中表达所述的核酸；和

e)在所述的宿主细胞中表达权利要求1的核酸分子，

由此由权利要求1的核酸分子编码的工程SUMO蛋白酶切割工程 SUMO，从而生产具有改变的氨基末端的所关心的蛋白。

10.根据权利要求9的方法，进一步包括具有改变的氨基末端的所 关心的蛋白的分离。

11.用于从宿主细胞中纯化蛋白的试剂盒，包括：

i)重组载体，包括：

a)编码工程SUMO的核酸分子，其中所述工程SUMO是SEQ ID  NO∶1所示的酵母Smt3蛋白；

b)启动子；

c)多克隆位点；和任选，

d)编码亲和标签的核酸序列；并且其中所述的启动子可操作地 连接于所述编码工程SUMO的核酸分子上，其中所述的编码亲和标签的 核酸序列，如果有的话，符合读框并可操作地连接于所述编码工程 SUMO的核酸分子，并且其中所述的多克隆位点允许符合读框并且直接 地将编码所关心的蛋白的核酸克隆到编码工程SUMO的Gly-Gly切割位 点的核酸序列的3’，和

ii)组合物，包括在Gly-Gly切割位点之后特异切割工程SUMO的 权利要求3的蛋白酶。

12.根据权利要求11的试剂盒，其中所述的试剂盒进一步包括宿主 细胞。

13.根据权利要求12的试剂盒，其中所述的宿主细胞是原核细胞。

14.根据权利要求13的试剂盒，其中所述原核细胞是大肠杆菌。

15.根据权利要求12的试剂盒，其中所述宿主细胞是真核细胞。