[发明专利]鉴别、分离和利用来自成人胰腺的内分泌祖细胞的方法

说明书

背景

人类膜突结合蛋白(prominin)1(PROM1)基因编码带糖基化表位的基因产物，所述糖基化表位被称为CD133。PROM1基因产物是一个五跨膜(pentaspan transmembrane)(5-TM)糖蛋白，属于新的5-TM蛋白质分子家族。该家族包括来自多个不同的物种、包括人类、小鼠、大鼠、蝇和蠕虫的成员。5-TM结构包括细胞外N-末端、两个短细胞内环、两个大细胞外环和细胞内C-末端。PROM1最初被证明表达在原始造血干细胞和祖细胞以及成视网膜细胞瘤上，现已证明在成血管细胞和神经干细胞以及发育上皮的顶端表面突起上也有PROM1表达。人骨髓、脐带血和外周血的CD133阳性组分已被证明能够在异种移植模型中有效地移植，并已被证明含有大多数粒细胞/巨噬细胞前体、NOD/SCID种群恢复细胞和CD34+树突状细胞前体。表型上，血液和骨髓中的CD133阳性细胞是CD34亮与CD34暗、CD71亮的CD133表达阴性细胞。至今尚未发现CD133分子的天然配体，其在造血组织中的功能也未知。

发明概述

在一个实施方案中，提供了鉴别细胞样本或组织样本中人类胰腺内分泌祖细胞的方法，其包括：将细胞样本或组织样本暴露于能标记表达膜突结合蛋白1基因产物糖基化形式的细胞的至少一种可检测试剂，从而鉴别出胰腺内分泌祖细胞。在另一实施方案中，提供了鉴别细胞样本或组织样本中人类胰腺内分泌祖细胞的方法，其包括：将细胞样本或组织样本暴露于至少一种可检测试剂，后者标记表达膜突结合蛋白1基因产物糖基化表位(被称为CD133)的细胞，从而鉴别出胰腺内分泌祖细胞。在另一实施方案中，所述至少一种检测标记是：与膜突结合蛋白-1基因产物糖基化形式结合且带检测标记的第一结合配偶体(binding partner)；或与膜突结合蛋白-1基因产物糖基化形式结合的未标记第一结合配偶体和与未标记第一结合配偶体结合且带检测标记的第二结合配偶体的组合。所述结合配偶体可以是(作为非限制性实例)抗体或凝集素(lectin)。在另一实施方案中，所述至少一种可检测试剂是：与膜突结合蛋白-1基因糖基化表位CD133/1或CD133/2结合且带检测标记的第一抗体；或与膜突结合蛋白-1基因糖基化表位CD133/1或CD133/2结合的未标记第一抗体和与未标记第一抗体结合且带检测标记的第二抗体的组合。在另一实施方案中，第一抗体结合膜突结合蛋白-1基因产物的至少一种其它糖基化表位。在另一实施方案中，所述检测标记是荧光团。在另一实施方案中，所述带检测标记的第一抗体是藻红蛋白缀合抗CD133/1抗体或藻红蛋白缀合抗CD133/2抗体。在另一实施方案中，还检测至少一种其它标记。在另一实施方案中，所述细胞样本是胰岛制备物。在另一实施方案中，所述细胞样本是人类胰腺组织。

在又一实施方案中，提供了从细胞群中分离或富集人类胰腺内分泌皮祖细胞的方法，其包括下列步骤：鉴别其中表达糖基化形式膜突结合蛋白1基因产物的细胞，然后将这种细胞与所述细胞群分开，从而分离胰腺内分泌祖细胞或富集其群体。在又一实施方案中，提供了从细胞群中分离或富集人类胰腺内分泌皮祖细胞的方法，其包括下列步骤：鉴别其中表达CD133的细胞，然后将CD133表达细胞与所述细胞群分开，从而分离胰腺内分泌祖细胞或富集其群体。上面描述了鉴别表达糖基化膜突结合蛋白1基因产物的细胞或CD133表达细胞的非限定性实施方案。在一个实施方案中，所述分离通过荧光激活细胞分选、利用抗体(非限制性范例)，包括如上所述的带检测标记的抗体来进行。在另一实施方案中，所述鉴别和分离通过利用结合了CD133结合部分的基质，从而在基质上结合混合群体中的CD133表达细胞来进行。所述CD133结合部分包括如上所述的抗体、凝集素或任一其它CD133结合配偶体。在一个这种实施方案中，磁珠结合表达CD133的细胞，分离结合了CD133表达细胞的磁珠，然后释放其上结合的CD133表达细胞，从而分离出CD133表达细胞。在另一实施方案中，还使用至少一种额外标记来进行分离或富集。在一个实施方案中，所述细胞群从胰岛制备物获得，所述制备物包括胰岛和外分泌组织的混合物。在另一实施方案中，所述细胞群从人类胰腺组织获得。在另一实施方案中，所分离或富集的人类胰腺内分泌祖细胞然后在体外被进一步扩增或培养。