[发明专利]使用基于荧光的DNA图像细胞分析术体内检测和/或诊断癌症的方法

说明书

本发明涉及通过体内定位细胞核并测量细胞核的紫外光吸收而体内确 定人或动物对象的细胞中细胞核核酸量的方法。

本发明还涉及通过体内定位细胞核并测量细胞核的紫外光吸收而体内 检测人或动物对象中癌细胞的方法。

类似地，本发明涉及诊断和/或预测人或动物对象中癌症的方法，其中 所述方法在体内进行并且依赖于定位细胞核并测量细胞核的UV光吸收。

癌症早期检测是治疗癌症患者中的关键要素。存在检测生物样品中的 癌细胞并因此诊断现有癌症或至少评估未来癌症发生可能性的多种可行方 法。这些不同的方法包括癌组织的实体物检查、癌细胞的形态学表征、免 疫组织化学染色及细胞结构(如膜和细胞核)表征、测量肿瘤特异性因子的表 达等。

检测癌细胞的一种可行方法是所谓DNA细胞分析术，其测量细胞核 DNA的量以便检测与正常DNA含量的偏离。假设若细胞因诱变事件而包 含比已知的标准物更少或更多的DNA，其中所述的标准物已知是非癌类 型，即“健康”或“正常”类型，则DNA含量的这种偏离表示重大染色体重排 并因此表示正在进行的癌症发生。

因此，通过核酸特异性染色法量化细胞核DNA正日益在癌症诊断领域 的研究和临床应用中进入实践。

通过流式细胞分析术(flow cytometry)或图像细胞分析术(image cytometry)对细胞核DNA含量的测量尤其基于以下假设：(i)与DNA结合的 染色剂的量正比例于存在的DNA的量和(ii)因发射、吸收或透射而从该染 色剂中产生的光学信号正比例于染色剂的量。

一般用于通过DNA图像细胞分析术测量细胞核DNA目的的一种DNA 特异性染色方法是以Feulgen和Rossenbeck命名的一种基于酸的反应，常 简称为Feulgen反应(福尔根反应)。实际上，福尔根反应是其中DNA由酸 水解以产生带游离醛基的无嘌呤DNA(即所谓脱嘌呤核酸，APA)的显色反 应。这些无嘌呤DNA随后与含有染料的希夫试剂反应，其中所述的染料与 游离醛基共价结合。

尽管福尔根反应对于DNA是特异性的，然而它具有多种缺点。福尔根 反应是耗时且相当繁琐的反应，需要仔细控制并加以验证以便产生可再现 及有意义的结果。一个问题源自如此事实：APA由常见用于去除嘌呤碱基 的HCl水解成更小片段。然而，APA分子的片段化导致从细胞核中去除这 些片段并且因此导致丢失可染色的DNA物质。

除了对于福尔根染色法而言与生俱来的这些缺点，也不能在体内通过 福尔根法使细胞核DNA着色，因为福尔根染色法本身可能是致诱变的并且 导致癌症发生。

现有技术的DNA图像细胞分析术的另一个关键特征是这些方法要求 这样的操作模式：其中将细胞铺展在例如玻片上旨在允许测量单个细胞。 然而，体内进行DNA细胞分析术测量无疑因这样的情况而复杂化，即不能 分离标本而不得不在不可能将单个细胞从其生理环境中分离出来的情况下 进行DNA测量。相反，当在体内即在人或动物对象中进行DNA图像细胞 分析术时，必须找到在不能够使单个细胞从其天然环境物理中分离的情况 下测量单个细胞的量的办法。

在本领域中已经尝试考虑通过配置新的显微设备而使得单个细胞在其 天然环境中可视化。

WO 2004/113962A2披露了允许观察厚层标本内细胞的微型化共聚焦 显微系统。

然而，迄今尚未解决的体内DNA图像细胞分析术的先决条件之一是确 定活组织中细胞核DNA的量。

因此，对这样的方法存在持续需求：其中所述的方法提供测量细胞核 DNA的量和体内检测人或动物对象中癌细胞和癌症的可靠、快速及有效的 途径。

本发明的目的是提供用于体内确定细胞核中双链细胞核核酸(如DNA) 的量的方法。

本发明的目的也是提供体内检测人或动物对象中存在癌细胞的方法。

本发明的又一目的是提供允许体内诊断存在癌症或可能发生癌症的方 法。

为了实现上述目的，提供如独立权利要求1中定义的方法。

根据本发明，提供了体内确定人或动物对象的至少一个细胞中细胞核 核酸的量的方法，其中所述方法包括步骤：

a)体内定位在人或动物对象中所述至少一个细胞的细胞核；

b)体内测量所述细胞核的紫外(UV)光吸收。