[发明专利]用于产生具有生物学活性的分泌型多肽的方法

权利要求书

1.一种用于产生具有生物学活性的分泌型多肽的方法，其包括：

(a)在有益于产生所述多肽的培养基中培养真菌宿主细胞，其中所述真 菌宿主细胞包含编码所述多肽的第一多核苷酸，所述第一多核苷酸与编码选 自下组的变体信号肽或变体前原肽的第二多核苷酸可操作连接：

(i)SEQ ID NO：2氨基酸1-17的第2位为Lys取代的亲本信号肽变体， 其中所述变体信号肽以符合读码框的方式连接至所述多肽的氨 基末端；和

(ii)SEQ ID NO：2氨基酸1-22的第18、19、20、21和22位氨基酸缺失 的亲本前原肽变体，其中所述变体肽以符合读码框的方式连接至 所述多肽的氨基末端；和

(b)自所述培养基分离所述具有生物学活性的分泌型多肽。

2.权利要求1的方法，其中所述变体信号肽在SEQ ID NO：2氨基酸1-17 的第2位为Lys取代。

3.权利要求1的方法，其中所述变体前原肽在SEQ ID NO：2氨基酸1-22 的第18、19、20、21和22位氨基酸缺失。

4.权利要求1的方法，其中所述亲本信号肽由SEQ ID NO：2氨基酸1-17 组成；且其中所述亲本前原肽由SEQ ID NO：2氨基酸1-22组成。

5.权利要求1的方法，其中所述变体信号肽是SEQ ID NO：4。

6.权利要求1的方法，其中所述多肽是激素或激素变体、酶、受体或其 部分、抗体或其部分、或报道物。

7.权利要求1的方法，其中所述真菌宿主细胞是丝状真菌或酵母细胞。

8.权利要求1的方法，其中所述第一多核苷酸编码由SEQ ID NO：8之成 熟多肽组成的多肽。

9.权利要求1的方法，其中所述第一多核苷酸是SEQ ID NO：7所示的编 码成熟多肽的序列。

10.权利要求1的方法，其中所述第一多核苷酸编码SEQ ID NO：10之成 熟多肽。

11.权利要求1的方法，其中所述第一多核苷酸是SEQ ID NO：9所示的编 码成熟多肽的序列。

12.SEQ ID NO：2氨基酸1-17的第2位为Lys取代的亲本信号肽变体。

13.一种亲本信号前原肽变体，其在SEQ ID NO：2氨基酸1-22的第18、 19、20、21和22位氨基酸缺失。

14.一种信号肽，其由SEQ ID NO：4之氨基酸序列组成。

15.一种分离的多核苷酸，其编码权利要求14的信号肽。

16.一种核酸构建体，其包含权利要求15的多核苷酸。

17.权利要求16的核酸构建体，其中所述编码信号肽的多核苷酸与编码 多肽的第二多核苷酸可操作连接，其中所述信号肽多核苷酸多核苷酸的3′端 紧挨着位于所述第二多核苷酸的起始密码子的上游。

18.一种重组表达载体，其包含权利要求17的核酸构建体。

19.一种重组宿主细胞，其包含权利要求17的核酸构建体。

20.一种分离的多肽，其由SEQ ID NO：8或SEQ ID NO：10之成熟多肽序 列与权利要求12的变体信号肽序列组成。

21.一种分离的多肽，其由SEQ ID NO：8或SEQ ID NO：10之成熟多肽序 列与权利要求13的前原肽序列组成。

22.一种分离的多核苷酸，其编码权利要求20或21的多肽。

23.一种核酸构建体，其包含权利要求22的多核苷酸。

24.一种重组表达载体，其包含权利要求23的核酸构建体。

25.一种重组宿主细胞，其包含权利要求23的核酸构建体。

26.一种用于产生具有脂肪酶活性的分泌型多肽的方法，其包括：

(a)在有益于产生所述多肽的培养基中培养权利要求25的宿主细胞；和

(b)自所述培养基分离所述具有脂肪酶活性的分泌型多肽。