[发明专利]通过定向进化产生催化优化的嵌合锌指重组酶

权利要求书

1.嵌合重组酶蛋白，其包含有效连接到锌指核苷酸结合结构域的 丝氨酸重组酶，使得该嵌合重组酶蛋白在被锌指核苷酸结合结 构域特异结合的DNA位点催化位点特异性重组并且使得该丝 氨酸重组酶被选择或进化为在嵌合蛋白背景中有效催化重组。

2.权利要求1的嵌合重组酶蛋白，其中所述丝氨酸重组酶结构域 是具有催化性丝氨酸亲核体的重组酶结构域，其催化一般的链 交换机制。

3.权利要求1的嵌合重组酶蛋白，其中所述丝氨酸重组酶选自： (a)Tn3，也称作EcoTn3；Hin，也称作StyHin；Gin，也称作 MuGin；Sin；Beta；Pin；Min；Din；Cin；EcoTn21；SfaTn917； BmeTn5083；Bme53；Cpe；SauSK1；SauSK41；SauTn552；Ran； Aac；Lla；pMER05；Mlo92；Mlo90；Rrh；Pje；Req；PpsTn5501； Pae；Xan；ISXc5；Spy；RhizY4cG；SarpNL1；SsolSC1904a； SsolSC1904b；SsoISC1913；Aam606；MjaM0014；Pab； HpylS607；MtulS_Y349；MtuRv2792c；MtuRv2979c； MtuRv3828c；MtuRv0921；MceRv0921；TnpX；TndX；WwK； lactococcal噬菌体TP901-1丝氨酸重组酶；酿脓链球菌(S. pyogenes)噬菌体φ370.1丝氨酸重组酶；酿脓链球菌噬菌体 φFC1丝氨酸重组酶；利斯特氏菌属(Listeria)噬菌体A118丝 氨酸重组酶；天蓝色链霉素(S.coelicolor)染色体SC3C8.24丝 氨酸重组酶；天蓝色链霉菌染色体SC2E1.37丝氨酸重组酶； 天蓝色链霉菌染色体SCD78.04c丝氨酸重组酶；天蓝色链 霉菌染色体SC8F4.15c丝氨酸重组酶；天蓝色链霉菌染色体 SCD12A.23丝氨酸重组酶；天蓝色链霉菌染色体SCH10.38c 丝氨酸重组酶；天蓝色链霉菌染色体SCC88.14丝氨酸重组 酶；链霉菌属噬菌体φC31丝氨酸重组酶；链霉菌属噬菌体R4 丝氨酸重组酶；芽孢杆菌属噬菌体φ105丝氨酸重组酶；芽孢 杆菌属噬菌体SPBc2丝氨酸重组酶；芽孢杆菌属原噬菌体 SKIN丝氨酸重组酶；金黄色葡萄球菌(S.aureus)ccrA丝氨酸 重组酶；金黄色葡萄球菌ccrB丝氨酸重组酶；结核分枝杆菌(M. tuberculosis)噬菌体Bxb1丝氨酸重组酶；结核分枝杆菌原噬 菌体φRV1丝氨酸重组酶；YBCK_ECOLI；Y4bA；Bja；Spn；Cac 1956；和Cac 1954；

(b)(a)的丝氨酸重组酶的突变蛋白。

4.权利要求3的嵌合重组酶蛋白，其中所述丝氨酸重组酶选自 Gin、Hin、Tn3、Sin、Beta、Pin、Min、Din和Cin和Gin的 突变蛋白、Hin的突变蛋白、Sin的突变蛋白、Beta的突变蛋 白、Pin的突变蛋白、Min的突变蛋白、Din的突变蛋白、Cin 的突变蛋白、Tn3的突变蛋白。

5.权利要求1的嵌合重组酶蛋白，其中所述锌指核苷酸结合结构 域是结合六核苷酸的二指锌指结合结构域。

6.权利要求1的嵌合重组酶蛋白，其中所述嵌合重组酶蛋白是 Tn3_GAGGAG，并且具有通过接头与优先结合6bp序列GAGGAG (SEQ ID NO：1)的二指锌指核苷酸结合结构域融合的来自Tn3 的结构域。

7.权利要求1的嵌合重组酶蛋白，其中所述嵌合重组酶蛋白是 Hin_GAGGAG，并且具有通过接头与优先结合6bp序列GAGGAG (SEQ ID NO：1)的二指锌指核苷酸结合结构域融合的来自Hin 的结构域。