[发明专利]通过发酵生产法尼基化二苯并二氮杂酮的方法

权利要求书

1.一种用于回收和浓缩结构式1的法尼基化二苯并二氮杂酮 的方法，

式1

所述方法包括如下步骤：

a)使能够产生所述法尼基化二苯并二氮杂酮的微生物菌株发 酵，从而产生包含所述法尼基化二苯并二氮杂酮的发酵液；

b)调节所述发酵液以允许所述法尼基化二苯并二氮杂酮与存在 于所述发酵液中的颗粒物相缔合；

c)从所述发酵液收获所述颗粒物，以便获得收获的颗粒物；

d)以与所述收获颗粒物成大约2∶1至大约5∶1的比例的合适 的有机溶剂体积提取所述收获的颗粒物，从而形成提取物；以及

e)处理所述提取物以形成包含所述式1的法尼基化二苯并二氮 杂酮的第一浓缩物，其中所述浓缩物包含所述法尼基化二苯并二氮杂 酮，所述浓缩物中法尼基化二苯并二氮杂酮的浓度比a)的所述发 酵液中的所述法尼基化二苯并二氮杂酮的浓度高大约50倍，并且其 中所述法尼基化二苯并二氮杂酮以所述发酵液中所述法尼基化二苯 并二氮杂酮的量的至少大约50％的量从a)的所述发酵液回收

2.如权利要求1所述的方法，其中所述法尼基化二苯并二氮杂酮以所述发酵液中所述法尼基化二苯并二氮杂酮的量的至少大约60 ％的量从a)的所述发酵液回收。

3.如权利要求1所述的方法，其中所述法尼基化二苯并二氮杂酮以所述发酵液中所述法尼基化二苯并二氮杂酮的量的至少大约65 ％的量从a)的所述发酵液中回收。

4.如权利要求1所述的方法，其中所述颗粒物包含存在于所述发 酵液中的微生物。

5.如权利要求4所述的方法，其中所述颗粒物进一步包含吸附树 脂a。

6.如权利要求4和5中任一项所述的方法，其中在步骤b)中将 所述发酵液的pH值调节至大约2至大约4。

7.如权利要求6所述的方法，其中所述发酵液进一步被调节至大 约2℃至大约10℃的温度范围。

8.如权利要求7所述的方法，其中将所述发酵液在所述温度范围 处维持大约16小时至大约72小时。

9.如权利要求1所述的方法，其中所述发酵在大约48小时至大 约110小时内完成。

10.如权利要求1所述的方法，其中所述微生物是细菌。

11.如权利要求10所述的方法，其中所述细菌是放线菌。

12.如权利要求11所述的方法，其中所述放线菌是小单孢菌、链 霉菌或红球菌属。

13.如权利要求12所述的方法，其中所述放线菌是具有IDAC保 藏号231203-01的小单孢菌属[S01]046或具有IDAC保藏号070905-01 的小单孢菌属[S01U02]046。

14.如权利要求1所述的方法，其中所述合适的有机溶剂包括i) 至少一种低级烷基醇；或ii)乙酸乙酯；或iii)乙腈。

15.如权利要求14所述的方法，其中所述低级烷基醇是乙醇、丙 醇、异丙醇、丁醇或甲醇、或它们的混合物。

16.如权利要求15所述的方法，其中所述低级烷基醇是甲醇。

17.如权利要求1所述的方法，其中所述水培养基是如表1中所示 的AP、CA、DZ、GP、HI、JA、MI、PI、QI、QP或YB。

18.如权利要求1所述的方法，其中所述水培养基是如表1和表2 中所示的QB、MA、KH、RM、JA、FA或HI。

19.如权利要求1所述的方法，其中步骤(c)使用超滤系统来进 行。

20.如权利要求19所述的方法，其中所述超滤系统具有一个或多 个过滤器元件，所述过滤器元件具有大约0.2～大约0.45微米的孔径尺 寸。

21.如权利要求1所述的方法，其中步骤(c)通过离心来进行。