[发明专利]制备L-甲硫氨酸的方法

权利要求书

1、在微生物中制备L-甲硫氨酸的方法，包括以下步骤：

-培养所述微生物，其中可被所述微生物的代谢所利用的丝氨酸的 量是增加的；和

-分离L-甲硫氨酸。

2、权利要求1的方法，其中所述微生物在富含丝氨酸的培养基中培 养。

3、权利要求2的方法，其中添加到所述培养基中的丝氨酸的浓度为 0.1mM至100mM，优选地为1至50mM，更优选地为5mM至20mM， 且最优选地丝氨酸的浓度为10mM。

4、前述权利要求中任一项的方法，其中所述微生物在参与丝氨酸代 谢或转运的蛋白质方面被遗传学修饰。

5、权利要求4的方法，其中一或多种参与丝氨酸合成的酶的含量和/ 或生物学活性与野生型微生物相比是升高的。

6、权利要求4或5的方法，其中所述参与丝氨酸合成的酶选自D-3- 磷酸甘油酸脱氢酶(SerA)、磷酸丝氨酸磷酸酶(SerB)和磷酸丝氨酸氨基转 移酶(SerC)。

7、权利要求5或6的方法，其中所述参与丝氨酸合成的酶被修饰以 降低或防止L-丝氨酸的反馈抑制。

8、权利要求7的方法，其中所述被反馈抑制的酶是D-3-磷酸甘油酸 脱氢酶(SerA)。

9、前述权利要求中任一项的方法，其中一或多种参与丝氨酸降解为 丙酮酸的酶的含量和/或生物学活性与野生型微生物相比是降低的。

10、权利要求9的方法，其中编码所述参与丝氨酸降解为丙酮酸的 酶的基因被破坏且优选地被消除。

11、权利要求9或10的方法，其中所述酶是丝氨酸脱水酶(sdaA)。

12、前述权利要求中任一项的方法，其中一或多种参与丝氨酸输出 的蛋白质的含量和/或生物学活性与野生型微生物相比是降低的。

13、权利要求12的方法，其中编码所述参与丝氨酸输出的蛋白质的 基因被破坏且优选地被消除。

14、权利要求12或13的方法，其中所述蛋白质是ThrE。

15、前述权利要求中任一项的方法，其中一或多种参与将丝氨酸转 化为甲基四氢叶酸的酶的含量和/或生物学活性与野生型微生物相比是升高 的。

16、权利要求15的方法，其中所述参与将丝氨酸转化为甲基四氢叶 酸的酶选自丝氨酸羟甲基转移酶(SHMT)和亚甲基四氢叶酸还原酶 (MetF)。

17、前述权利要求中任一项的方法，其中一或多种参与甲硫氨酸合 成的酶的含量和/或生物学活性与野生型微生物相比是升高的。

18、权利要求17的方法，其中所述参与甲硫氨酸合成的酶选自天冬 氨酸激酶(lysC)、高丝氨酸脱氢酶(hom)、高丝氨酸-O-乙酰转移酶 (MetA)、O-乙酰高丝氨酸硫化氢解酶(MetZ)、钴胺素(I)依赖性甲硫氨酸合 酶I(MetH)和钴胺素(I)非依赖性甲硫氨酸合酶II(MetE)。

19、前述权利要求中任一项的方法，其中一或多种转录调节物蛋白 的含量和/或生物学活性与野生型微生物相比是降低的。

20、权利要求19的方法，其中所述转录调节物蛋白是McbR。

21、前述权利要求中任一项的方法，其中所述微生物选自棒状细 菌、分枝杆菌、链霉菌科、沙门氏菌、大肠杆菌(Escherichia coli)、志贺氏 菌、芽孢杆菌、沙雷氏菌和假单胞菌。

22、权利要求21的方法，其中所述微生物是谷氨酸棒杆菌 (Corynebacterium glutamicum)、大肠杆菌、或枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)。

23、前述权利要求中任一项的方法，其中L-甲硫氨酸于培养基或所 述微生物的细胞中浓缩。