[发明专利]保持、改善和恢复软骨细胞的软骨表型的方法

权利要求书

1.从分离的软骨样本富集调节细胞群的方法，所述方法包括以下步骤：

a)机械和/或酶处理分离的软骨样本以获取独立的细胞，

b)将所述按步骤a)所获独立的细胞转移至细胞培养容器使软骨细胞以单层扩 增，

c)将所述容器置于合适的细胞培养条件中，从而获得粘附细胞群和包含非粘 附细胞群的上清液，

d)至少2天后和/或当至少约30％汇合时从所述容器收集包含所述非粘附细胞群的 所述上清液，

e)从所述上清液收集相当于所述调节细胞群的所述非粘附细胞群。

2.如权利要求1所述方法，其特征在于，所述软骨样本是关节软骨样本。

3.如权利要求1所述方法，其特征在于，所述软骨样本是半月软骨样本。

4.如权利要求1-3中任一项所述方法，其特征在于，步骤(a)包括用胶原酶A 处理分离的软骨样本。

5.一种包含两种或多种不同细胞群组合的组合物，该组合物包含：

a)一种包含调节细胞的细胞群，其为(i)得自软骨活检的新鲜分离的软骨细胞 群，或(ii)通过从得自软骨活检的新鲜分离的软骨细胞的P0培养上清液收集非粘附 细胞获得的富集的调节细胞群

b)选自下组的一种或多种细胞群：经传代软骨细胞群，间叶干细胞群，软骨 细胞前体细胞群。

6.如权利要求5所述组合物，其包含富集的调节细胞群，其中所述富集的调 节细胞占组合物细胞总数中的相对量介于1-75％。

7.如权利要求5或6所述组合物，其特征在于，所述细胞群包含从关节软骨 获得的调节细胞。

8.如权利要求5或6所述组合物，其特征在于，所述细胞群包含从半月软骨 获得的调节细胞。

9.一种药物组合物，其包含权利要求5到8中任一的组合。

10.一种包含权利要求5到8中任一细胞组合的支撑物。

11.权利要求5到8中任一组合在制备用于治疗软骨缺陷的细胞治疗剂中的应 用。

12.一种治疗软骨缺陷的方法，所述方法包括给予具有所述软骨缺陷的患者权 利要求5到8中的任一组合。

13.一种可通过权利要求1到4中任一方法获得的非粘附性、非传代调节细胞 群，其作为药物使用。

14.一种治疗软骨缺陷的方法，所述方法包括给予具有所述软骨缺陷的患者通 过权利要求1到4中任一方法获得的调节细胞群。

15.一种药物组合物，其包含通过权利要求1到4中任一方法得到的非粘附性、 非传代调节细胞群。

16.一种非粘附性、非传代调节细胞群在体外改善、保持或恢复经扩增或传代 的软骨细胞群的软骨细胞表型稳定性中的应用。

17.一种非粘附调节细胞群在使间叶干细胞体外分化为成软骨系细胞中的应 用。

18.一种制备供ACT移植的细胞群的方法，所述方法包括以下步骤：

a)机械和/或酶处理分离的软骨样本以获取独立的细胞，

b)将所述按步骤a)所获独立的细胞转移至细胞培养容器使软骨细胞以单层扩 增，

c)将所述容器置于合适的细胞培养条件中，从而获得粘附细胞群和包含非粘 附细胞群的上清液，

d)至少2天后和/或当所述容器中达到至少约30％汇合时从所述容器收集包含 所述非粘附细胞群的所述上清液，

e)从所述上清液收集所述非粘附细胞。

f)将步骤(e)所获所述非粘附细胞群与成软骨细胞群组合，所述成软骨细胞群 不是富集的调节细胞群。