[发明专利]快速检测阴道毛滴虫的免疫层析试条及制备方法

权利要求书

1.一种快速检测阴道毛滴虫的免疫层析试条及制备方法，包括衬板和设置在衬板上依次搭接的样品垫层、喷有金标单抗的结合垫层、喷有点膜单抗和羊抗鼠二抗的NC膜及吸水层，其特征在于：所述的金标单抗为胶体金标记的单克隆抗体AP33中的一株，所述点膜单抗为单克隆抗体AP33中的另一株。

2.根据权利要求1所述的快速检测阴道毛滴虫的免疫层析试条及制备方法，其特征在于：所述的单克隆抗体AP33为4A2、4E7、4F8、4F11、4H11。

3.根据权利要求1或2所述的快速检测阴道毛滴虫的免疫层析试条及制备方法，其特征在于：所述点膜单抗为4A2，金标单抗为4F8。

4.根据权利要求1或2所述的快速检测阴道毛滴虫的免疫层析试条及制备方法，其特征在于：所述点膜单抗为4A2，金标单抗为4F11。

5.根据权利要求1或2所述的快速检测阴道毛滴虫的免疫层析试条及制备方法，其特征在于：所述点膜单抗为4F8，金标单抗为4E7。

6.根据权利要求1或2所述的快速检测阴道毛滴虫的免疫层析试条及制备方法，其特征在于：所述点膜单抗为4F8，金标单抗为4F11。

7.种制备权利要求1所述试条的方法，其特征在于包括以下步骤：

1)单抗的纯化  杂交瘤细胞培养上清和腹水，用孔径为0.22μm的微孔滤膜过滤，除去较大的凝块及脂肪滴，然后分别依次用50％、33％饱和硫酸铵沉析1次，再通过蛋白A亲和层析柱收集、合并洗脱液中含蛋白的部分，然后将其置于0.01mol/L PB或0.01mol/LPBS或0.01mol/LTris-HCl中透析，换液3-5次，4℃条件下9000-12000r/min离心1h，除去聚合物，得到纯化好的单抗，用BCA蛋白浓度测定试剂盒测定蛋白浓度；

2)胶体金的制备取0.01％HAuCl4水溶液100ml，加入1％柠檬酸三钠1-2ml，加热煮沸使溶液由蓝逐渐变为紫红色，直至变红，即为胶体金溶液，并用紫外分光法确定胶体金最大吸收峰；

3)胶体金探针的制备  确定胶体金标记蛋白的最适稳定量，将胶体金的PH值调至8.2，加入最适稳定量的单抗，搅拌混合15-30min，加1％的BSA或0.05％的PEG20000，继续搅拌15-60min，在4℃环境中静置1-2h；4℃条件下1500-3000r/min离心10-20min，取上清液，接着在4℃条件下，9000-12000r/min高速离心20-60min，小心吸弃上清液，沉淀用金标保存液0.01mol/LPB或0.01mol/LPBS或0.01mol/LTris-HCl重新悬浮至原体积的1/10，用0.45μm滤膜过滤，4℃环境中避光保存备用，所述金标保存液中含1％的BSA或0.05％的PEG20000、0.05％NaN3；

4)试纸条的组装①将衬板、样品垫层、结合垫层、包被NC膜及吸水层裁剪成适当尺寸，浸泡在处理液0.05mol/LPBS中至少3h以上，在37℃烘干16h以上备用，所述处理液中含1％BSA、0.02％PEG20000、0.1mol/LNaCl、1％NaN3；②将金标单抗、点膜单抗、羊抗鼠二抗制成工作浓度，将金标单抗喷涂在结合垫层上，将点膜单抗和羊抗鼠二抗喷涂在NC膜上制成检测线和质控线，将样品垫层、喷有金标单抗的结合垫层、喷有点膜单抗和羊抗鼠二抗的NC膜及吸水层依次搭接在衬板上组成试条，置37℃烘箱烘20-30min，4℃密封贮存。