[发明专利]一种测定人血浆和/或血清中重组双功能水蛭素的方法

权利要求书

1.一种测定人血浆和/或血清中重组双功能水蛭素的方法，其特征是采用超滤法和冷冻干燥法对待测样品进行预处理，在分析色谱柱分离后用质谱检测器检测，包括以下步骤：

(1)蛋白分离

水溶性的水蛭素样品与血浆蛋白的分离：以20％甲酸水溶液酸化并稀释血样，混匀后置于超滤管Millipore，50K于4000g，25℃条件下超滤20min；

(2)样品富集

水蛭素的浓缩：超滤液置于1.5ml Eppendorf管中，-70℃条件下冷冻干燥，完全冻干后取出，-70℃条件下保存；

(3)样品分析

将冻干后的样品取出，加入10％甲酸50μl复溶解，10μl进样做LC/MS分析，

色谱条件：采用填料为十八烷基键合相硅胶为填料的液相色谱柱，高效液相系统采用通用型高压泵，流动相采用甲醇和0.1％甲酸溶液，梯度洗脱；

质谱条件：单级四极杆质谱检测器，电喷雾离子源，正离子模式下选择离子监测M/Z 1433，干燥气流速：13L/min，雾化气压力：50psig，干燥气温度：350℃，碎片电压：220V，毛细管电压：5500V。内标法定量。

2.根据权利要求1所述的测定人血浆和/或血清中重组双功能水蛭素的方法，其特征是所述的待测样品为人血浆或血清。

3.根据权利要求1所述的测定人血浆和/或血清中重组双功能水蛭素的方法，其特征是所述的步骤(3)的色谱条件其中色谱柱采用Agilent Extend C₁₈分析柱150×2.1mm，i.d.，5μm；柱温为35℃；流动相是甲醇-0.1％甲酸水溶液梯度洗脱，流速为0.3ml/min；质谱条件采用电喷雾离子化，采集正离子。