[发明专利]获自基质细胞的能着色的表皮等同物,制备方法及用途

说明书

技术领域

本发明涉及能着色的(pigmenting)表皮等同物(epidermis equivalent)，其包含来自基质细胞(matrix cell)的分化的细胞，以及涉及其制备方法。 

本发明也涉及包含所述表皮等同物的、能着色且任选含有毛囊的重建皮肤(reconstructed skin)，其制备方法及其在评估局部用化妆品、药物或皮肤病学产品的效果中的用途。 

本发明的重建皮肤也可用于制备准备移植到哺乳动物、更特别是移植到人类患者如三度烧伤患者上的移植物(grafts)。 

背景技术

开发重建皮肤模型的努力已经进行了许多年，一方面，重建皮肤模型将使开展在机理领域和生理领域更好理解皮肤作用所必需的研究成为可能，另一方面，重建皮肤模型构建化妆品和/或药物活性试剂的活性预测实验或者可选地构建局部用成分的副作用预测实验。 

因此，在或多或少地程度上，已经可以开发与人类皮肤相似的模型。例如，可以提及下列文献记载的模型：EP 0 285 471，EP 0 285 474，EP 0 418 035，WO-A-90/02796，WO-A-91/16010，EP0 197 090，EP0 020 753，FR 2 665 175，FR 2689 904。 

通常，这些文献记载的重建皮肤模型由真皮乳头成纤维细胞和/或从外上皮鞘(outer epithelial sheath)(也称外根鞘(Outer Root Sheath)或ORS)移取的细胞制备，因为这些细胞容易获得。实际上，当拔出发丝后这些细胞就被移出，而且当将它们置于支持物(通常是真皮等同物)上，且在合适培养介质中培养时，这些细胞能够制造表皮。 

当角质化细胞来自ORS时，这些表皮模型中可能存在的少许黑素细胞并不多，使得不能获得满意的着色的(pigmented)皮肤模型(Lenoir MC，Bernard BA，Pautrat G，Darmon M，Shroot B.Outer root sheath cells of human hair follicle are able to regenerate a fully differentiated epidermis in vitro.Dev Biol.1988 Dec；130(2)：610-20和Limat A，Breitkreutz D，Hunziker T，Boillat C，Wiesmann U，Klein E，NoserF，Fusenig NE.Restoration of the epidermal phenotype by follicular outer root sheathcells in recombinant culture with dermal fibroblasts.Exp Cell Res.199l June；l94(2)：2l8-27)。 

为了获得着色的皮肤模型，已知可将商业可获得的表皮黑素细胞加入角质化细胞培养物中(FR 2 665 175)。然而，获自该模型的着色特性并不能满意地再现自然着色。 

基质细胞，其位于毛球(hair bulb)中并围绕真皮乳头形成小细胞群集，主要由角质化细胞前体构成，该角质化细胞前体构成生发层(germinative)并迅速增生和分化，形成毛干，因此在头发生长循环中起到关键作用。从毛发生长初期阶段开始至结束，这些基质细胞将增生直至毛发生长中期，而后在毛发生长终期阶段消失(Ebling FJ.The biology of hair.Dermatol Clin.1987 Jul；5(3)：467-81.Review；Saitoh M，Uzuka M，Sakamoto M.Human hair cycle.J Invest Dermatol.1970 Jan；54(1)：65-81)。基质也包括负责头发着色的滤泡黑素细胞。 

这些基质细胞的增生和分化由真皮乳头调节(Botchkarev VA，Kishimoto J.Molecular control of epithelial-mesenchymal interactions during hair follicle cycling.JInvest Dermatol Symp Proc.2003 Jun；8(1)：46-55.Review)。 

发明内容

惊奇地是，本申请人已经证明，在人造真皮上培养基质细胞能产生特别包括角质化细胞和黑素细胞的完全表皮。