[发明专利]用于检测激素的磁颗粒竞争法化学发光免疫分析测定试剂盒及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及免疫分析医学领域，具体地，本发明提供了一种磁颗粒竞争法化学发光免疫分析定量测定试剂盒及其制备方法。

背景技术

由于纳米材料的表面效应、量子尺寸效应及宏观量子隧道效应等，使得纳米材料在许多领域呈现出常规材料所不具备的特性，“纳米材料”、“纳米技术”已经渗透到日常生活的各个领域。因此，纳米材料具有十分广泛的应用前景。

纳米技术引入现代医学即形成了载药纳米颗粒，纳米颗粒的尺寸一般比生物体内的细胞小得多，这就为生物学研究提供了一个新的研究途径，即利用纳米颗粒进行细胞分离及利用纳米颗粒制成特殊药物或新型抗体进行局部定向治疗等。

磁纳米颗粒具有超顺磁性，在磁场下具磁场响应性，将磁颗粒应用于免疫检测的固相，将大大提高反应的表面积，更容易进行固相、液相分离，可提高检测的灵敏度。采用微小的磁颗粒作为固相可增加包被表面积，从而增加抗原或抗体的吸附量，既加快了反应速度，也使清洗和分离更简便。

近十年来标记免疫分析技术的研究和应用发展迅速，已广泛应用于生物医学基础理论研究及临床疾病诊断各领域。其中技术工艺成熟，具有先进性且实用性强，易于推广的主要有:放射免疫分析、酶免疫分析、时间分辨荧光免疫分析和化学发光免疫分析等四种。

磁化学发光技术是酶标记免疫技术的新发展，该技术以微米级磁颗粒为载体，利用表面有机物提供的羧基活性基团与蛋白质氨基共价结合，采用抗体进行“搭桥”成免疫磁颗粒，可进行抗原、抗体反应。该技术的新颖之处有:(1)利用顺磁铁颗粒为固相载体，外包被单克隆抗体，增加抗原、抗体的接触面积及底物发光面积，提高反应的灵敏度，并采用旋转磁场使磁颗粒起搅拌作用及分离结合抗原-抗体与游离抗体的作用；(2)在液相反应中，使用发光增强剂，将水分子从发光底物的发光位点排开，同时还可缩短发光的达峰时间；(3)金刚烷衍生物是理想的碱性磷酸酶发光底物，酶促反应摩尔衰退系数达18,600mol/(s·cm)，发光时间长，信号强，检出限量可达10^-18g/mL；(4)采用单克隆抗体，提高了反应的特异性。

现有国外的化学发光免疫分析试剂盒为封闭式全自动化学发光测量系统，需要昂贵的全自动化学发光测量仪，从而限制了推广使用，无法广泛地应用于临床诊断和科研工作。本发明的试剂盒可应用于开放式的化学发光测量仪，可以通过磁颗粒分离剂，操作简便，使用成本低，更易推广应用。

发明内容

本发明同时解决了上述问题，即将磁颗粒技术与化学发光免疫分析技术有效地结合，提供了一种能够简便、快速、灵敏、稳定地检测试剂盒，该试剂盒适于在产业上有效地推广应用。

本发明的目的是提供一种用于检测激素的磁颗粒竞争法化学发光免疫分析定量测定试剂盒。

本发明的再一目的是提供一种制备上述试剂盒的方法。

根据本发明的试剂盒包括:

1)校准品；

2)包被激素抗体的磁颗粒；

3)酶标记的激素抗原；以及

4)上述酶所作用的化学发光底物。

根据本发明的试剂盒，其中，所述标记酶为碱性磷酸酶或辣根过氧化物酶。

根据本发明的试剂盒，其中，所述化学发光底物为1，2-二氧乙烷类衍生物、鲁米诺或异鲁米诺。

优选地，上述试剂盒中，所述1，2-二氧乙烷类衍生物为(金刚烷)-1，2-二氧乙烷、3-(2′-螺旋金刚烷)-4-甲氧基-4-(3″-磷酰氧基)苯基-1，2-二氧乙烷、CSPD或CDP-Star。

进一步，根据本发明的制备上述试剂盒的方法包括以下步骤:

1)以纯品原料配制校准品；

2)以激素抗体包被磁颗粒；

3)用酶标记激素抗原；

4)分装上述校准品、酶标记抗原和该酶所作用的化学发光底物；以及

5)组装为成品。

在根据本发明的方法中，在所述包被步骤2)中:

激素抗体包被的磁颗粒为1～3μm粒径、四氧化三铁内核、表面包裹带有活性基团如氨基(NH₂-)、羧基(-COOH)的聚合物，其使用浓度为5～10mg/mL；

通过碳二亚胺法进行包被磁颗粒；

以封闭液封闭包被的磁颗粒，所述封闭液为含有1.0％牛血清白蛋白、1.0％酪蛋白、pH值为7.4的0.05mol/L磷酸缓冲液。

在标记步骤3)中，所述酶标记抗原以20～50％小牛血清配制而成。

在上述方法中，优选，所述酶为碱性磷酸酶或辣根过氧化物酶。