[发明专利]一种增强肽段免疫活性的制备方法和用途

说明书

技术领域

本发明涉及利用多肽合成的方法建立一种多肽结构，即将多拷贝抗原肽片段与一个VKGFY多肽片段相连。按照这种方式制备而成的多肽分子具有提高机体免疫系统对抗原肽片段的免疫反应。可作为免疫制剂用于对疾病的预防和对疾病的生物(免疫)治疗，本发明属于生物医药领域。

技术背景

生物体的遗传基因被存储在多聚核苷酸链上，遗传基因编码着执行生物学功能的蛋白质。生物体内的蛋白质多种多样，它们行使着各种生物学功能维持生命活动。蛋白质的种类虽然多不胜举，但它们都是由20个自然界存在的天然氨基酸组成。由于氨基酸的组成和排列顺序的差异导致了蛋白质的千差万别。一般来说，含有50个以上氨基酸的分子被称为蛋白质，50个以下的被称为短肽。目前发现最小的功能小肽是只含有3个氨基酸的3肽物质“促甲状腺素释放激素”(TRH)。

由于人类基因组计划的完成和人类蛋白组计划的开展，将会有越来越多的蛋白质功能片段被发现并被作为药物应用到生物医药领域中来。现已开发并在临床上得到应用的多肽药物有“催产素”、“胸腺肽α1”、“胸腺五肽”等，有在天然肽链的基础上进行人工改构制备成为用于治疗消化道出血和肢端肥大症的多肽药物“奥曲肽”等。蛋白质中的功能片段常常能筛选到含有几十个或小到只有三个氨基酸组成的多肽片段，它们为人工合成蛋白质功能片段并将它们投入应用奠定了基础。

按照人为的预先设计将具备特定生物学功能的短肽连接在一起，经过人为加工改造而产生的多功能多肽片段达到预期的目的。这是继“基因工程”后时代拓展而出的又一项生物技术——“多肽工程”。“多肽工程”在应用领域中具备如下的优势：

1.多肽产物可企业话大规模地合成，产量高，纯度高。

2.多肽药物的用量小，生物活性高，毒性低。

3.生产多肽药物的企业占地小，设备简单，设备周转利用率高，企业属低能耗，低排放、低污染的绿色环保型企业。

多肽制药是一个新兴的制药领域，随着人类基因组计划的完成和“多肽工程”的深入发展，必将会有更多的多肽药物面市。

发明内容

人体的免疫器官主要有胸腺、骨髓、脾脏、淋巴结等。脾脏是人体最大的免疫器官，T淋巴细胞和B淋巴细胞都在脾脏内部发育成熟，如果脾脏被摘除会导致机体的体液免疫和细胞免疫功能的紊乱，发生暴发性感染。

美国Tufts大学教授Najjara于1970年发现一种脾脏来源的四肽物质TKPR具有显著的抗肿瘤、抗病毒的活性并被命名为Tuftsin，中文名为“促吞噬素”。实验证实Tuftsin能使脾内脾小体增多，生发中心生长活跃。Tuftsin能够提高粒细胞，单核细胞、巨噬细胞等免疫细胞的趋化、游离、吞噬活性，提高免疫细胞分泌细胞因子IL-1、IL-2、TNF-α、IFN-γ、INF-β等，提高T淋巴细胞的TH1/Th2平衡向TH1方向偏移，提高细胞毒的作用，增强机体淋巴系统的细胞免疫活性。

Tuftsin对肺癌、肝癌、胃癌、黑色素细胞瘤、胆管癌等多种恶性肿瘤具有较明显的治疗效果。Tuftsin抗肿瘤的机制主要与它既能促进粒细胞和单核巨噬细胞的游走、吞噬、抗原递呈和细胞毒功能外，又能增加白细胞的数目并刺激提高T淋巴细胞的功能有关。Tuftsin作为一个参与免疫调节的体液因子具有显著的抗肿瘤、抗感染和抗病毒的生物学活性。据报道国外已开始将Tuftsin用于对晚期恶性肿瘤和AIDS的治疗。

机体内的专职抗原递呈细胞，包括粒细胞、单核细胞、巨噬细胞和树突状细胞等都是从同一个始祖细胞分化发育而来，它们具有对外来抗原的胞饮吞噬，抗原加工和递呈的功能。Tuftsin本身是一个仅含有4个氨基酸TKPR的小肽(4肽)，无抗原性，它可以特异性的结合抗原递呈细胞表面的受体，促进细胞的吞噬，抗原加工和递呈。已经发现以Tuftsin作为抗原肽载体共价连接人工合成的抗原小肽能够增强机体对无抗原性，或抗原性很低的小肽的免疫反应，提高抗体滴度和体内细胞因子NO、TNF、IL-1、IL-2、IFN-γ的分泌水平，能够诱导T淋巴细胞的扩增，激发CD4，Th1类型的免疫反应。因此Tuftsin不仅具有激发T淋巴细胞的细胞毒作用，同时还有激发B淋巴细胞的体液免疫的活性。