[发明专利]一种重组巨细胞病毒gp52蛋白及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及基因工程领域，具体地涉及一种重组巨细胞病毒gp52蛋白及其应用。

背景技术

巨细胞病毒(cytomegalovirus，CMV)属疱疹病毒β亚科，其感染在人群中广泛存在。越来越多的证据证明，妇女在妊娠初期受CMV原发感染是引起胎儿宫内感染和发育缺损的重要原因，甚至认为它在致畸方面的作用比风疹更为重要。CMV也是器官移植失败和艾滋病病人并发感染死亡的主要原因，对非免疫缺陷者常导致长期隐形感染或出现非特异症状，甚至引起感染细胞的转化、畸变或癌变，同时也与多种肿瘤的发生相关，如宫颈癌、前列腺癌、结肠癌及下波济肉瘤。该病毒可以从多种途径传播。建立CMV感染的快速、准确检测方法是预防CMV感染的关键所在。

目前，巨细胞病毒感染诊断方法主要有脱落细胞及组织病理检查、病毒分离和抗原检测、分子杂交试验和血清学检查，这些方法多基于高特异性的抗原建立。本发明提供了一种用基因工程方法生产的重组抗原，与常用的病毒提取抗原组分相比，可为巨细胞病毒感染的检测提供更为特异、准确的原料。

发明内容

(一)要解决的技术问题

本发明的目的是提供一种重组巨细胞病毒gp52蛋白，本发明的另一目的是提供该重组巨细胞病毒gp52蛋白在制备单抗、多抗、检测试剂盒及蛋白芯片中的应用。

(二)技术方案

本发明提供了一种编码巨细胞病毒gp52蛋白的重组DNA，其核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示。同时提供了由该重组DNA序列编码的重组巨细胞病毒gp52蛋白，其氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示。

本发明还提供了一种重组巨细胞病毒gp52蛋白的表达载体pET-28a-gp52，它是将权利要求1所述的重组DNA序列插入到质粒pET-28a上得到的重组质粒，其质粒图谱如附图1所示。将表达载体pET-28a-gp52导入大肠杆菌中，得到表达重组巨细胞病毒gp52蛋白的工程菌株。

本发明提供了一种检测巨细胞病毒感染的试剂盒，其组分中的抗原是所述的重组巨细胞病毒gp52蛋白。用于标记重组gp52蛋白的标记物选自酶、荧光物质、胶体金中的一种或多种，标记物的制备采用本领域技术人员所熟知的常规方法。所述试剂盒还包括固定抗体的固相，固相可以是本领域技术人员所熟知的常用固相，例如聚苯乙烯、微量滴定板、免疫层析用滤纸等。

优选地，本发明所述的试剂盒采用酶标抗原，其中，包被抗人IgM抗体的浓度是100ng/孔，酶标抗原的工作浓度是4mg/mL；包被系统由0.05mol/L的碳酸盐缓冲组成，pH＝9.6；封闭系统由0.01mol/L PBS、10％小牛血清和0.1％硫柳汞钠组成，pH＝7.2；酶标抗原稀释液由0.01mol/L PBS、10％小牛血清和0.1％硫柳汞钠组成，pH＝7.2。

本发明还公开了所述的重组巨细胞病毒gp52蛋白在制备单抗、多抗及蛋白芯片中的应用。

(三)有益效果

采用本发明提供的重组巨细胞病毒gp52蛋白制备的诊断试剂盒，与市场上的同类试剂盒相比，具有特异性强、灵敏度高等优点，很好的满足了巨细胞病毒感染临床诊断的需要。

附图说明

图1PCR扩增产物的凝胶电泳图；

图2是表达质粒pET-28a-gp52的构建流程图；

图3是15％SDS-PAGE电泳图，其中M表示Marker，1和2表示目的蛋白。

具体实施方式

以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的保护范围。实施例1重组巨细胞病毒gp52蛋白的制备

1.1巨细胞病毒(CMV)gp52蛋白抗原表位筛选及目的基因克隆

通过计算机分析HCMV磷蛋白150(phosphoprotein 150，pp150)的全部氨基酸序列(GENEBANK，ACCESSION：M16022；VERSION：M16022.1；GI：330643)筛选出pp150蛋白内的强抗原表位，即从第2个氨基酸至第273个氨基酸。其基因片段的起始DNA序列为agtttgcagtttatcggtctacag，终止DNA序列为gtcaaggagctgcgcatgtgcctt，以此来设计PCR扩增引物：

上游引物：5’CGGGATCCGCCAGCCGCAACGGTCTG，含XhoI酶切位点；

下游引物：5’CGAATTCTTACGTTACAGAATCCTCGCT，含EcoRI酶切位点和TAA终止密码。