[发明专利]一种人源性细胞因子生发制剂及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种生发制剂及其制备方法，具体涉及一种人源性细胞因子生发制剂及其制备方法，还涉及该人源性细胞因子生发制剂的脂质体剂型。

背景技术

据流行病学调查表明，世界头发疾病的发病情况非常严重，总发病率达到60％，其中男性发病率74.6％，女性24.4％，脱发患者占77.3％。毛囊在毛发的生长发育中起关键性作用。目前关于毛囊生长发育和毛发疾病的基础研究有了令人瞩目的进展，但是针对毛发疾病的临床用药仍较为匮乏，FDA仅仅认证了治疗脱发的内服药非那雄胺和外用药米诺蒂尔2类药。市场上有很多生发的中药制剂，但大多存在生发疗效不一、机制不明、成分不稳定等诸多缺点。因此，开发新的有效的生发药物有巨大的临床意义。

研究发现毛囊及其周围组织能通过自分泌和旁分泌产生一些生物活性因子，经各种途径影响毛发的生长发育和生长周期。其中，对毛囊有重要意义的细胞因子主要有：肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor，HGF)、碱性成纤维细胞生长因子(fibroblast growth factor basic，FGF)、表皮生长因子(epidermal growth factor，EGF)、胰岛素样生长因子(insulin-likegrowth factor，IGF)、转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1，TGF-β1)、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)，这些细胞因子的深入研究为脱发的治疗提供了依据。但是，这类药物多难以直接通过皮肤屏障到达毛囊组织，在毛囊局部难以达到有效浓度；同时这些药物又因容易降解、生物活性下降而不能通过静脉或口服给药完成治疗。

表皮的角质层是药物透皮吸收的主要屏障，药物局部治疗成功的关键是药物必须透过角质层到达病变部位达到有效浓度并维持一定时间。脂质体是将药物包封于类脂质双分子层所形成的超微球状载体制剂。脂质体类似细胞结构，有生物膜的特性和功能，能促进透皮吸收和保持药物在皮肤高浓度。脂质体用作皮肤给药的载体具有以下优点：(1)脂质体与皮肤角质层脂质有高度的相似性，能增强药物进入角质层或表皮的类脂内，增加药物在皮肤的滞留量和滞留时间。(2)脂质体的皮肤靶向作用使得进入血液循环的药物量少，减少了药物由于全身吸收引起的不良反应。(3)脂质体包封药物后，可提高药物的稳定性。(4)脂质体无毒、可生物降解，应用安全无刺激。

发明内容

本发明的目的在于提供一种有效的人源性细胞因子生发制剂，本发明的另一目的还在于提供这种人源性细胞因子生发制剂的制备方法。

本发明的上述目的是通过以下的技术方案实现的：

即一种人源性细胞因子生发制剂，其特征是：其成分包括脂质成膜材料卵磷脂、胆固醇及活性成分生发细胞因子，它们之间的重量份数比为：2～6∶1～4∶1～5；所述卵磷脂选自卵黄卵磷脂或大豆卵磷脂；所述生发细胞因子选自人的成纤维细胞、胎盘细胞、角质细胞或毛乳头细胞的培养上清液的蛋白冻干粉末；所述生发细胞因子被包封在脂质膜中。

上述人源性细胞因子生发制剂为脂质体冻干粉末剂型。

本发明的制备工艺包括以下步骤：

(1)采用饱和硫酸铵分级沉淀法至硫酸铵饱和度达70％来浓缩培养上清液，透析除盐，-70℃冰冻干燥浓缩液，获得富含与毛发生长有关的细胞因子的蛋白冻干粉末。其主要活性成分为：肝细胞生长因子(HGF)、碱性成纤维细胞生长因子(FGF)、表皮生长因子(EGF)、胰岛素样生长因子(IGF)、转化生长因子-β1(TGF-β1)、血管内皮生长因子(VEGF)。细胞可以是成纤维细胞、胎盘细胞、角质细胞或毛乳头细胞；

(2)将卵磷脂和胆固醇用氯仿和甲醇按2∶1体积配比溶解，在旋转蒸发仪上于48℃、120r/min条件下旋转蒸除溶剂，得黄绿色乳状脂膜；

(3)称取步骤(1)的蛋白冻干粉末，用PBS PH7.4溶解，加入步骤(2)所得脂膜中，并加入乙醚混匀，在超声波清洗器上于20℃、160W条件下超生振荡乳化10min，在旋转蒸发仪上于38℃、120r/min条件下旋转蒸除溶剂，至凝乳/豆腐样凝胶形成；

(4)用PBS PH7.4混悬步骤(3)所述凝胶，静置1h，然后在超声破碎仪上于冰浴、150W条件下，间歇超声乳化，得乳白色乳液，过滤除残渣，收集滤液；

(5)将步骤(4)所得滤液于-70℃冰冻干燥24h，即得富含细胞因子活性成分的脂质体冻干粉末。