[发明专利]利用空化混悬萃取分离设备高效提取假马齿苋皂苷的方法

说明书

技术领域

本发明属医药技术领域，它涉及一种植物提取物及其高效提取工艺，具体是以假马齿苋全草为原料提取假马齿苋皂苷，可应用于抗癌、抗抑郁和治疗老年痴呆药物的制备。

背景技术

假马齿苋(Bacopa Monninera(L.)Wettst)，又名“白花猪母菜”，为双子叶植物药玄参科植物假马齿苋的全草。为1年生匍匐草本，常生于水边、湿地及沙滩，海拔550～650m，主要分布在热带和亚热带地区。在国外，印度对其研究的记载较多，在国内主要分布于台湾、福建、广东、云南及四川等省，中医理论中其具有清热解毒、消炎退肿之功效，用于治疗赤目痢疾、目赤肿痛、丹毒、痔疮中痛、皮肤红肿等症状，在印度医药理论中认为假马齿苋具有安神、增进记忆力和智力，促进学习获得，并有抗氧化的作用。到目前为止，从假马齿苋中分离得到20多个化合物，其中以三萜皂苷化合物为主。

发明内容

本发明的技术方案是提供了该提取物的高效制备方法和用途。其得率可达到8％-10％。

本发明的高效提取工艺流程见说明书附图。附图中的流程图的流程说明如下：称取假马齿苋的全草，经过风干，超微粉碎后，加入水于超声波提取器中提取，将提取液浓缩至一定体积，再用活性炭进行吸附脱色，接着利用空化混悬萃取分离装置先用7乙酸乙酯萃取，回收乙酸乙酯将水溶液部分用氯仿萃取，接着回收氯仿并将水溶液部分再用正丁醇萃取，回收正丁醇得假马齿提取物，再以药理活性检测结果为指导进行分离纯化，得到活性假马齿苋皂苷单体化合物。

实验研究证明：假马齿苋皂苷对体外人肿瘤细胞K-562，SHG-44，A-549，HCT-8，PC-3M等细胞株的生长均有抑制作用；对S180荷瘤小鼠的肉瘤组织也有抑制作用；对抑郁病人和老年痴呆均有明显的改善作用。假马齿苋皂苷是有效的治疗肿瘤和老年痴呆的药物。

本发明对假马齿苋皂苷进行了抗肿瘤的评价实验。

(一)假马齿苋皂苷对体外人肿瘤细胞的抑制作用。

1、实验目的：

对体外人肿瘤细胞A-549(肺癌)、MCF-7(乳腺癌)、IA-9(卵巢癌)、CAKI-1(肾癌)、PC-3(前列腺癌)等细胞株生长的影响。

2、方法：

试验方法为国际通用的SRB法：根据细胞生长速率，将处于对数生长期的肿瘤细胞以90μl/孔接种于96孔培养板，贴壁生长24小时再加药10μl/孔。每个浓度设三复孔。并设相应浓度的生理盐水溶媒对照及无细胞调零孔。肿瘤细胞在37℃、5％CO₂条件下培养72小时，然后倾去培养液，用10％冷TCA固定细胞，4℃放置1小时后用蒸馏水洗涤5次，空气干燥。最后加入150μl/孔的Tris溶液，酶标仪520nm波长下测定OD值。

3、结果：如下表1所示。

表1.假马齿苋皂苷抗人类肿瘤的疗效试验结果(ED₅₀，μg/ml)

表1的结果表明，假马齿苋皂苷对5种不同肿瘤细胞株均显示明显抑制作用。

(二)假马齿苋皂苷对老年痴呆的治疗作用。

1、实验目的：

评价假马齿苋皂苷对老年痴呆的治疗作用。

2、方法：

取ICR小鼠，雄性，体重20±5g。随机分为3组，阴性对照和阳性对照组每次均灌以等体积的生理盐水，其余1个实验组先分别给药7天，末次给药后，除阴性对照组外，其余各组均用东莨菪碱灌胃10mg/kg，给药后1小时进行跳台实验。

3、实验结果：假马齿苋皂苷(10-50mg/kg)能显著延长小鼠跳台潜伏期并使错误次数明显减少(表2)。

表2假马齿苋皂苷对小鼠跳台作用影响

4、结论：

假马齿苋皂苷具有显著的治疗老年痴呆症作用和促智活性。

具体实施例

实施例一

将500g干燥假马齿苋Bacopa monnieri.L的全草进行超微粉碎，浸泡于5000mL水中，并用超声波提取技术提取1次；合并提取液，减压回流至2000mL左右，得假马齿苋水提物，用活性碳进行吸附脱色；利用空化混悬萃取设备先用乙酸乙酯萃取，至乙酸乙酯部分基本无色，回收乙酸乙酯；取水部分再用氯仿萃取，至氯仿基本无色，回收氯仿；又取水部分最后用正丁醇萃取，至正丁醇无色，合并正丁醇部分溶液进行减压回流，干燥，即得假马齿苋皂苷42.8g，得率为8.56％，皂苷含量39.9％。

实施例二