[发明专利]一种快速提取植物根际土中AM真菌环境DNA的方法

权利要求书

1.一种快速提取植物根际土中AM真菌环境DNA的方法，包括根际土中AM真菌相关结构的收集、真菌基因组DNA的提取、用AM真菌特异性引物进行nestedPCR扩增、及扩增片段测序及测序结果分析步骤，其特征在于本方法中所用根际土AM真菌DNA由下列方法得到：

a.称取100g根际土壤样品，经湿筛倾析法收集AMF厚垣孢子及根外菌丝结构，并将其置于无菌的研钵中，用液氮冷却材料，待水份蒸发后，加入少量石英砂，充分研磨材料使之呈粉末状，然后迅速将粉末状的材料转入2ml的离心管中；

b.在装有材料的离心管中加入65℃水浴预热的2×CTAB提取液1ml，使材料完全分散在提取液中，在65℃水浴锅中温浴1小时，期间每20分钟摇匀1次；

c.将温浴的材料取出置于室温下，待冷却至室温后加入300μl等体积的苯酚-氯仿颠倒混匀，然后6500转/分钟离心20min；

d.取上清液10μl转移到另一0.5ml的离心管中，再加入300μl 20％Chelex-100树脂混匀，置于99.9℃的PCR仪上煮沸15min；

e.待样品冷却至室温，瞬时离心30s，取上清液稀释20-100倍置于-20℃冰箱中保存备用或直接作为DNA模板进行PCR扩增。