[发明专利]从桑叶中连续提取生物碱、黄酮和多糖活性成分的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种从桑叶中连续提取生物碱、黄酮和多糖活性成分的方法，属于从天然产物中提取生物活性成分的技术。

背景技术

桑叶异名铁扇子，为桑科植物桑(Morus alba.L)的叶，味苦，甘、寒，分布于全国大部分地区。现代药理研究证明桑叶可抑制血糖升高，可预防和治疗糖尿病。此外，桑叶还具有祛风清热、凉血明目的功效，药性平和且无毒副作用，已经被国家卫生部正式归入“既是食品又是药品”之列。

桑叶中含有多种活性成分，包括生物碱、多糖、黄酮、多酚、氨基酸以及多种微量元素，其中最主要的活性成分为生物碱、多糖及黄酮。Asano N从桑叶中分离鉴定出11种生物碱，其中1-脱氧野尻霉素(DNJ)在桑叶中的含量达0.1％，远高于其他植物，是α-葡萄糖苷酶最有效的抑制剂之一，具有很强的降血糖作用。桑叶总多糖也是桑叶中的主要活性成分，对四氧嘧啶糖尿病小鼠有显著的降血糖作用。桑叶中总黄酮含量约占桑叶干重的1.0％～3.0％，主要含有芦丁、异槲皮苷，槲皮素-3-三葡萄糖苷及紫云英苷等，具有抗氧化、抑制血清脂质增加以及抑制动脉粥样硬化形成等作用。有研究表明，桑叶黄酮也具有降血糖作用，且将黄酮与DNJ结合，比单独的DNJ更能有效地抑制血糖的上升。且因此提取分离和纯化桑叶中的生物碱、多糖以及黄酮类活性有效部位，制成中成药或功能保健食品均具有广阔的前景。

目前关于桑叶中活性有效部位的分离方面已有一些相关专利，如国内专利号03101988.9“一种含有桑叶总碱浸膏的制剂及其制备方法”，公开了一种桑叶中的生物碱的制备方法；专利号200510012388.8“一种桑叶黄酮提取方法”，公开了一种分离桑叶中的黄酮的方法；专利号01129976.2“一种桑叶多糖产品及其用途”，公开了一种多糖的提取工艺；专利号200610038713.2“桑叶降血糖有效组分组合物及制备方法”公开了一种分离桑叶中的生物碱和多糖的方法。但是这些专利仅能分离出一种或两种有效成分，其它有效成分则在纯化过程中不得不被作为杂质除去，不仅造成了很大的资源浪费，产品成本也较高。而且现有的专利均以水为溶剂提取桑叶中的生物碱，而我们的研究实验表明，水对生物碱的提取率低于一定浓度溶剂的提取率，而且水提液中成分复杂，给后续的分离带来了困难。另外，目前对提取的桑叶多糖一般概念笼统，对其结构和类别的分析还未见报道。

发明内容

本发明的目的是提供一种从桑叶中连续提取生物碱、黄酮和多糖活性成分的方法，该方法过程简单，提取物中生物碱、黄酮和多糖含量高。

本发明是通过以下技术方案加以实现的，一种从桑叶中连续提取生物碱、黄酮和多糖活性成分的方法，其特征在于包括以下过程：

1)按干燥桑叶重量与溶液的体积比为1∶10～15，将粉碎后的干燥桑叶浸泡于体积浓度为20％～90％的乙醇溶液，或浸泡于体积浓度为10％～90％的丙酮溶液，在95℃条件下回流提取3次，每次提取30min，将提取液混合并减压过滤，得到滤液和滤渣。

2)将步骤1)所得滤液经减压蒸发除去乙醇，然后按干燥桑叶重量与去离子水的体积比为1∶10～15加入去离子水，静置2h，离心分离。上清液通过大孔树脂X-5、D101、D4020、或H103，在20～30℃吸附，首先用离子水洗脱大孔树脂，然后用乙醇或丙酮溶液洗脱大孔树脂，收集洗脱液，洗脱液经减压蒸发去除乙醇或者丙酮，得到质量含量为30％～50％的黄酮类化合物，黄酮的主要成分是芦丁和异槲皮苷。

3)流经过大孔树脂后的溶液，通过型号为001×7、001×4或001×7×7的阳离子交换树脂在20～30℃吸附5～10h，先用去离子水冲洗树脂，再以氨水洗脱树脂得到洗脱液，洗脱液浓缩至无氨水残留，再通过型号为201×7、D201或201×4的阴离子交换树脂吸附，用去离子水洗脱阴离子交换树脂得洗脱液，洗脱液经减压蒸发，得到质量含量为40％～60％的生物碱化合物，生物碱的主要成分是1-脱氧野尻霉素(DNJ)。

4)将步骤1)中得到的桑叶滤渣用10～15倍体积的去离子水在60～90℃下煎煮两次，减压过滤，收集滤液，滤液经过活性炭脱色，脱色后的滤液减压浓缩至提取液体积的1/5～1/10，之后向浓缩液中加入乙醇，使浓缩液中乙醇体积浓度为10％～60％，静置10～15h，离心分离得沉淀物。再依次用无水乙醇、丙酮以及乙醚洗涤沉淀物，得到质量含量为55％～85％的多糖类化合物，该多糖化合物主要成分为酸性多糖，其分子量500,000～550,000Da。