[发明专利]亚血红素短肽化合物及在抗白内障药物制备中的用途

说明书

技术领域

本发明提供一种亚血红素短肽化合物，同时还提供了其在治疗白内障疾病中的医药用途，属于生物制药技术领域。

背景技术

本发明所涉及的亚血红素短肽化合物，是以铁卟啉为辅基的微过氧化物酶，包括由细胞色素C(Cyt C)水解而来的八肽(简称：MP-8)、九肽(简称：MP-9)、十一肽(简称：MP-11)。它们均含有共价结合的亚血红素，并在肽段中含有一个组氨酸残基，人们发现它们是一类很好的过氧化物酶模拟物。它们具有较好的抗氧化活性。

发明内容

本发明公开了一种亚血红素短肽化合物，是一种新的化合物。

本发明还提供了亚血红素短肽化合物在抗白内障药物制备中的用途。

本发明所说的亚血红素短肽化合物包括亚血红素(Deuterohemin，用Dh表示)、短肽(用β-Ala-His-X-Lys表示)；其中，X可以是Thr-Val-Glu或其中的任意一个氨基酸用其相应的β-氨基酸、γ-氨基酸代替的氨基酸序列。亚血红素与短肽间的连    接方式是亚血红素上的羧基与肽链上的氨基以酰胺键相连。

上述结构可以是单体，即亚血红素上的两个羧基之一与肽链连接，两种单体形式为同分异构体，结构如A.、B所示；

本发明中化合物的制备方法以本领域技术人员所通常的Fmoc固相肽合成法合成。原料及试剂：接肽树脂为Rink Amide MBHA树脂。氨基酸衍生物为Fmoc-β-Ala-OH、Fmoc-His(Trt)-OH、Fmoc-Thr(But)-OH、Fmoc-β-Thr(But)-OH、Fmoc-Val-OH、Fmoc-β-Val-OH、Fmoc-Glu(otBu)-OH、Fmoc-γ-Glu(otBu)-OH、Fmoc-Lys(Boc)-OH。

偶联反应缩合剂为苯骈三唑-1-氧-三(二甲氨基)磷六氟磷酸盐(BOP)、1-羟基苯骈三氮唑(HOBT)、N-甲基吗啉(NMM)。脱保护剂为20％哌啶/DMF溶液。切割试剂为三氟乙酸。

树脂用DMF溶胀30分钟，然后脱保护20分钟，用DMF洗涤，反应器中加入氨基酸衍生物及缩合剂，室温反应2小时，洗涤，再脱保护，加入氨基酸衍生物及缩合剂，重复进行至接上所有的氨基酸。反应器中再加入切割试剂，室温反应1小时，后过滤，滤液在乙醚中沉淀，得粗品。

粗产品的纯化：采用高效液相色谱法进行纯化。洗脱液为三氟乙酸水溶液，乙腈。流速为20ml/min，监测波长为214nm。

本发明的化合物具有清除自由基抑制白内障形成的活性，按照常规的制药技术，可以将其制备成任何一种常规药剂，例如：片剂、丸剂、胶囊剂、冲剂、喷雾剂、口服液、混悬液、透皮吸收剂、注射剂等。

做为含有本发明化合物组合药，其组成为含有治疗有效量的本发明化合物，所说的化合物在药物组合物当中可以是单独使用，也可以与其他药物配合使用。

本发明的药物组合物除了含有上述化合物之外，还含有常规的药物赋形剂，例如：粘合剂、崩解剂、填充剂、润滑剂、调味剂、增溶剂、溶剂、防腐剂等。

以下药理实验证明本发明具有治疗白内障的药理活性和医疗效果：

实验例1、

亚血红素短肽化合物D1~D4对大鼠晶状体细胞体外抗白内障的保护作用

据统计，在60岁以上的老年群体中，不同程度的老年性白内障眼病发病率接近100％。老年性白内障是晶状体在老化过程当中逐渐发生蛋白质变性，使晶体由透明状态变成浑浊或不透明状态的结果。老年性白内障的发病机理非常复杂，为多种因素共同作用的结果。目前多数研究认为氧自由基损伤是老年性白内障形成的首位危险因素，许多实验表明氧化损伤发生在晶状体浑浊之前。硒模型是简单快速、可重复的通过氧化损伤而致晶状体浑浊的白内障模型。Ostadaiova等于1978年首先报道了给大鼠乳鼠一次注射亚硒酸钠溶液可诱发大鼠产生间歇性核性白内障，此后亚硒酸钠逐渐成为诱导老年性白内障模型的典型药物，用硒模型模拟老年性白内障，探讨老年性白内障的发病机理和防治方法。

正常人晶状体房水中H₂O₂的浓度为23-30μmol/L，而几乎所有白内障患者的房水H₂O₂均高于正常人，平均值为82μmol/L，最高可达663μmol/L。实验表明高浓度的过氧化氢能够100％的诱导培养晶状体发展为白内障。