[发明专利]展示狂犬病病毒保护性抗原的犬Ⅱ型腺病毒活载体重组疫苗无效
| 申请号： | 200710055986.2 | 申请日： | 2007-08-22 |
| 公开（公告）号： | CN101406698A | 公开（公告）日： | 2009-04-15 |
| 发明（设计）人： | 扈荣良;张守峰;刘晔;李忠 | 申请（专利权）人： | 中国人民解放军军事医学科学院军事兽医研究所 |
| 主分类号： | A61K39/205 | 分类号： | A61K39/205;A61P31/14;C12N15/861;C12N15/11;C12N15/47;C12N15/62 |
| 代理公司： | 吉林长春新纪元专利代理有限责任公司 | 代理人： | 赵 正 |
| 地址： | 130062吉*** | 国省代码： | 吉林;22 |
| 权利要求书： | 查看更多 | 说明书： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 展示 狂犬病 病毒 保护性 抗原 载体 重组 疫苗 | ||
1.一种展示狂犬病病毒保护性抗原的犬II型腺病毒活载体重组 疫苗，其特征在于：以犬II型腺病毒为载体，在其结构蛋白基因的 疏水性位点插入狂犬病病毒保护性抗原基因或表达抗原表位的核苷 酸序列，使外源抗原或表位在腺病毒表面与其结构蛋白融合表达，所 述的疏水性位点位于犬II型腺病毒结构蛋白六邻粒。
2.根据权利要求1所述的重组疫苗，其特征在于：利用重叠PCR 分别在犬II型腺病毒全基因组六邻粒基因超变区的4个位点，按六 邻粒的转录阅读框分别插入狂犬病病毒保护性抗原基因，使其与六邻 粒在腺病毒表面融合表达。
3.根据权利要求2所述的重组疫苗，其特征在于：利用含犬II 型腺病毒全基因组质粒pPOLYII-CAV2中两个单一酶切位点得到含 六邻粒基因的大片段，将其克隆入pET-28a载体，获得重组质粒 pET-LH，再利用pET-LH中大片段的两个单一酶切位点得到含六邻粒 基因的小片段，将其克隆入pET-28a载体，获得重组质粒pET-SH， 通过重叠PCR将狂犬病病毒中和抗原表位分别插入六邻粒基因超变 区内的4个不同位点，其位点分别在犬II型腺病毒全基因组的17378 bp、17450bp、17623bp和18084bp处，并将PCR产物克隆入pMD18-T 载体，进行序列测定，测序正确后，利用六邻粒中两个单一酶切位点 将改造后的六邻粒基因克隆入pET-SH，最后，按照上述路线返向克 隆，获得重组犬II型腺病毒全基因组。
4.根据权利要求1所述的重组疫苗，其特征在于：所述的狂犬病 病毒保护性抗原基因为狂犬病病毒糖蛋白膜外区序列为：
GGCCCAAATTCCCTATTTACACGATACCAGACACACTTGGTC
CCTGGAGACCGATCGATATACATCATCTCAGTTGCCCAAACAAT
TTGGTTGTGGAGGATGAAGGATGCACCAACCTGTCAGGGTTCT
CCTACATGGAACTTAAAGTTGGACACATCTCAGCCATAAAGGTG
AACGGGTTCACTTGCACAGGCGTTGTGACAGAGGCAGAAACGT
ACACTAACTTTGTTGGTTATGTCACCACCACGTTCAAAAGAAAG
CATTTCCGCCCAACACCAGATGCATGTAGAGCCGCGTACAACTG
GAAGATGGCCGGTGACCCCAGATATGAAGAGTCTCTACACAGT
CCGTACCCTGACTACCATTGGCTTCGAACCGTAAAAACCACAA
AGGAGTCTATCGTTATCATATCTCCAAGTGTGGCAAATTTGGACC
CATATGATAACTCCCTTCACTTGAGGGTCTTCCCTAGCGGAAAG
TGCTCAGGAATAACGGTGCCTTCTGTCTACTGCTCAACTAACCA
CGATTACACCGTTTGGATGCCTGAAATCCTGAGACTAGGGACAT
CTTGTGATATTTTTACTAATAGTAGAGGGAAGAGAGCATCCAAG
GGGAGCAAGACCTGTGGCTTTGTAGATGAAAGGGGCCTATATA
AGTCTCTAAAAGGCGCATGCAAACTCAAGTTATGTGGAGTTCCT
GGACTTAGACTTATGGACGGAACATGGGTCTCGATGCAGACATC
AAATGAGACCAAATGGTGTCCTCCCGGTCAGTTGGTTAATCTGC
ACGACCTTCACTCAGACGAAATTGAGCATCTTGTTGTAGAGGA
GTTGGTCAAGAAAAGAGAGGAGTGTCTGGATGCACTAGAGTCC
ATCATAACCACCAAGTCAGTGAGTTTCAGACGTCTCAGTCATTT
AAGAAAACTTGTCCCCGGGTTCGGAAAGGCATATACCATATTCA
ACAAGACCTTGATGGAGGCTGAAGCTCACTACAAGTCAGTCAG
GACTTGGAATGAGATCATCCCCTCAAAAGGGTGTTTGAGAGTT
GGAGGGCATGTTTTAATCCCAGAGATGCAATCATCCCTCCTCCA
GCAACATATAGAGTTATTGGAATCCTCAGTTATTCCCCTGATGCA
CCCCCTTGCAGACCCGTTCACAGTTTTCAAGGACGGCGATGAG
ATTGAGGATTTTGTGGAAGTTCACCTTCCCGATGTGCACGAACA
GGTCTCAGGGGTTGACCTGGGTCTCCCGAACTGGGGGAAG。
5.根据权利要求1所述的重组疫苗，其特征在于：所述的表达抗 原表位的核苷酸序列为：
TGAACCTAGTATGTCAATAGGGCTCCAGGATCCGAG或
CCCGGGTGGAGCCCGATCGATATAGGCGCCTCTCTAAAAGGCGC
ATGCAAACTCAAGTTATGTGGAGTTCTTGGACTTAGACTTATGG
ACGGAACATGGGGGCCCAGTAATGAGACCAAATGGTGTCCTCC
CGATCAGTTGGTTAATCTGCACGACTTTCGCTCAGACGAAATTG
AGCATCTTGTTGTAGAGGAGGCTAGC。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息，商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于中国人民解放军军事医学科学院军事兽医研究所，未经中国人民解放军军事医学科学院军事兽医研究所许可，擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作，请联系【客服】
本文链接：http://www.vipzhuanli.com/pat/books/200710055986.2/1.html，转载请声明来源钻瓜专利网。
