[发明专利]结核病特异抗原快速诊断试剂盒

说明书

技术领域

本发明属于免疫诊断领域，具体涉及一种结核病特异抗原快速诊断试剂盒。

背景技术

结核病是世界范围内的重要的经济和医学问题。1995年世界上死于结核病的人数超过任何感染性疾病。病例死亡率估计在未治疗的人群中为55％，在治疗的病人中为15％。作为一种古老的传染病，结核病的疫情在全球呈上升趋势。据WTO估计，目前全世界约有20亿人感染结核杆菌，每年有800万新发病例和300万人的死亡[1]。在我国，根据2000年第四次全国结核病调查估算，全国约有5.5亿结核病例，将近全国人口的一半[2]。我国目前结核病的形式严峻。尽快建立先进的诊断技术和治疗措施，是一个紧迫的任务。不仅关系到千万人身心健康，也是关系到国民生计和国家经济发展的重要问题。

随着诊断技术的进步以及对结核分枝杆菌研究的不断深入，结核病诊断的实验技术层出不穷，涌现出许多新的检验方法[3]。目前，细菌学检验仍是诊断结核病常用方法。痰涂片镜检是确诊的依据，也是发现结核病最经典，最有效的手段。为了提供检出率，还可使用荧光镜检法。血清学方法为结核病的快速，准确诊断提供了另一种选择。由于结核分枝杆菌的抗原性较弱，属间和种间有共同的抗原决定族，体液免疫与结核病的相关性不太确切，因而寻找灵敏度和特异性均高的单体蛋白是目前这个领域研究的一个热点。除此以外，PCR具有敏感性高，特异性强以及快速等优点，但不能鉴别感染菌的死活，同时也由于极易被污染而产生假阳性结果，给诊断带来不确定性。PCR-荧光探针杂交法，PCR-微孔板杂交法，PCR-分子灯塔法等均具有简便，快速，抗污染，灵敏度高，特异性强等优点属于比较先进的分子生物学诊断技术，也是结核病辅助诊断的有效方法。基因芯片技术是新近发展起来的技术，主要用于结核杆菌耐药基因突变检验，具有快速和灵敏的优点。连接酶链反应虽然没有PCR的灵敏度高，但具有比较高的识别能力，适用于结核病初筛，可用于早期诊断。结核分枝杆菌噬菌体法具有廉价，简单，特异等特点，同时能鉴别菌的死活，有望成为结核菌耐药性的快速检测技术。然而，目前这些方法都有一定的特点和优势，但又不同程度存在一些缺陷。因此，发现和建立更完善和准确快捷的结核病诊断方法或技术对于结核病的诊断和治疗不仅是必须的，而且还相当紧迫。

在所有上述诊断技术中，血清学技术主要是基于经典的抗原抗体反应以及酶联的显色反应或酶促化学发光反应或胶体金标记技术，因其可靠，简便以及快速而受到青睐。机体感染结核菌后，可以产生各种抗体，诱导产生这些抗体的抗原是结核分枝杆菌的各种组份，其中一类重要的成份是该菌分泌的各类蛋白(酶)。在结核分枝杆菌的培养滤液里发现了100多种分泌蛋白质，这些蛋白在结核病人的免疫反应中起着重要作用，因此在结核病的诊断和预防及其治疗上有着很好的运用前景。寻找新的免疫原性强和种属特异度高的结核抗原，发展快速、敏感、特异的诊断方法，是及时发现、治疗并控制结核病的关键。

发明内容

本发明旨在通过基因工程表达并纯化desA蛋白，制作desA单抗，提供一种结核病血清学检测的方法。其具体应用方法包括酶联免疫反应法，酶促化学发光法及胶体金标记法等。

酶联免疫法(ELISA)：利用双抗体夹心法将一株desA单抗固相于酶标微反应孔上，将另一株desA单抗或多抗标记辣根过氧化物酶(HRP)，通过TMB显色检测血清中的结核病特异性抗原。将TMB显色底物更换为Luminol化学发光底物，可以定量检测结核病抗原的具体含量。其优点是检测信号强，线性范围宽。此外将胶体金标记DesA单抗或多抗，利用免疫纸层析技术开发出的胶体金快速诊断试纸条，具有灵敏度高，快速方便，不需用昂贵的检测设备等优点。

具体实施方式

实施例1、酶联免疫法(ELISA)检测结核病特异性抗原。

采用基因工程表达并纯化desA蛋白并制作desA单抗包被酶联板，用另一株单抗或多抗标记辣根过氧化物酶，与其他试剂组成试剂盒，应用双抗体夹心法检测人血清或血浆中的结核病特异性抗原，用于临床结核病人感染的筛查。

【试剂盒组份】

(1)测结核病特异性抗原酶联板   1块(96孔)

(2)样品稀释液                 1瓶(7ml)

(3)测结核病特异性抗原酶标抗体 1瓶(13ml)

(4)阳性对照(已灭活)           1瓶(1ml)

(5)阴性对照(已灭活)           1瓶(1ml)

(6)20×洗涤液                 1瓶(50ml)