[发明专利]鸡白细胞介素16基因及其真核表达质粒构建及免疫效应

说明书

[技术领域]本发明涉及动物医药生物工程领域，是一种鸡白细胞介素16基因及其真核表达质粒与应用。

[背景技术]细胞因子作为机体内细胞之间相互作用的主要介质，在机体的免疫应答、炎症反应、造血功能、胚胎发育及机体的生长发育等各个方面都起重要作用。20世纪80年代以来，随着细胞因子的研究进展，人们逐渐认识到细胞因子的免疫增强作用。细胞因子对免疫细胞的分化和增殖、抗原的识别和提呈、抗体的产生和调节、免疫细胞之间的联络等一系列从识别到效应的免疫应答过程都有极其重要的作用。可以说细胞因子对于免疫系统就如激素对于内分泌系统，神经递质对神经系统一样重要。细胞因子控制着疫苗免疫和病原微生物感染机体后免疫应答的类型和方向，其对免疫应答的调节方式最为接近机体正常的调节机理，细胞因子作为疫苗增强剂具有其他佐剂无法比拟的优点。

白细胞介素16(Interleukin-16，IL-16)，是1982年由Cruikshank实验室从抗原刺激的单核细胞中分离提纯的，IL-16前体主要来源于外周血单核细胞由631个氨基酸构成，无生物学活性，被白介素1β转化酶在Asp 510和Ser 511位酶切后，形成121个氨基酸大小的C端分泌性IL-16，它以非共价方式结合为四聚体结构，并具有了生物学活性。同时抑制人类和动物获得性免疫缺陷病毒在CD4+T细胞的复制从而达到阻滞HIV感染的目的。巩艳等采用基因工程技术重组的IL-16使Jurkat细胞表面IL-2R的表达水平上调18.54％，刺激了T淋巴细胞活化，即rIL-16具有活化T淋巴细胞的生物学活性。

已知有多种细胞能产生IL-16包括CD4+和CD8+T细胞、嗜酸性粒细胞、肥大细胞、树突状细胞和非免疫细胞的气道上皮细胞等。IL-16是CD4+T细胞的趋化因子，IL-16通过和CD4分子相互作用选择性地产生对CD4+细胞的趋化作用。它能上调细胞IL-2R的表达水平，因此可诱导对IL-2和IL-15依赖的细胞的扩增。研究表明，IL-16对Th1和Th2可能具有不同的作用。IL-16可诱导炎症部位的Th1细胞的迁移、聚集和激活，抑制某些Th2细胞因子IL-13、IL-5的产生。

IL-16也是CD4+T细胞的一种刺激生长因子，能诱导细胞由G₀期进入G₁期，但不能诱导细胞分裂。对CD4+T细胞、单核/巨噬细胞和嗜酸粒细胞有化学趋化和免疫调节作用，诱导IL-2R的表达。IL-16可诱导GM-CSF、TNFα和IL-6等细胞因子的合成和释放。最早的鸡IL-16克隆及鉴定的报道来自于Min.W等(2004)，他们在艾美球虫感染鸡的肠上皮内淋巴细胞的EST cDNA文库中克隆出IL-16的ORF后，通过Northern blot研究了各组织中IL-16的转录，发现鸡IL-16的转录仅在淋巴组织中能检测到。将IL-16基因在COS-7细胞中表达，并证明IL-16具有对脾淋巴细胞的诱导活性，因此，IL-16是具有较好应用前景的免疫佐剂。

[具体实施方式]

1.本发明使用的真核表达载体pcDNA3.1(+)为Invitrogen公司的产品。鸡白细胞介素16基因的重组质粒PCIL-16为四川大学动物疾病防控生物工程研究中心克隆并保存。使用的限制性内切酶BamH I、EcoR V，T4 DNA连接酶、Taq DNA聚合酶等均购自成都天泰生命科技有限公司。

2.引物是根据Genbank上已发表的IL-16序列(Y15006)和真核表达载体pcDNA3.1(+)上的酶切位点设计并合成的，并在基因上下游分别引入酶切位点BamH I和EcoR V。

引物序列为：上游引物：5‘-ATAGGATCCATGAGCGAAGACAACAGCCAG-3’

下游引物：5‘GCGGATATCTTACAAAGTTTCAGATGCCTTT-3’