[发明专利]一种复合型生物表面活性剂和它的生产方法

权利要求书

1.一种复合型生物表面活性剂，其特征在于该复合型生物表面活性剂由枯草芽孢杆菌产生，该复合型生物表面活性剂中脂类物质的质量百分含量为98.1±0.2％；该复合型生物表面活性剂中蛋白质的质量百分含量为19.1±0.2％；该复合型生物表面活性剂中糖类的质量百分含量为0.7±0.1％；所述复合型生物表面活性剂临界胶束浓度分别为4.2～5.0g/L和1.25～1.39g/L，它们分别将蒸馏水的表面张力值从78mN/m下降到38.4～39.8mN/m和40.3～40.8mN/m；所述脂类物质的含量是利用脂类物质在有机物中的可溶性进行测定；所述蛋白质的含量是采用考马斯亮蓝法进行测定；所述糖类的含量是通过苯酚-硫酸法进行测定。

2.一种生产权利要求1所述复合型生物表面活性剂的方法，其特征在于：将枯草芽孢杆菌接种于富集培养液中，将富集后的菌种接种于好氧发酵培养液中进行发酵培养，通过测定好氧发酵培养液表面张力值的变化确定复合型生物表面活性剂的产生以及好氧发酵培养时间，取好氧发酵培养液高速离心除去菌体，然后用酸沉降的方法将枯草芽孢杆菌可能产生的脂肽类生物表面活性剂沉淀下来，并通过高速离心分离除去，将离心后的上清液通过乙酸乙酯萃取的方法得到复合型生物表面活性剂。

3.根据权利要求2所述生产复合型生物表面活性剂的方法，其特征在于包括以下步骤：

A、将枯草芽孢杆菌于30～37℃下活化24h后，接种于富集培养液中，在温度30～37℃，转速200～250rpm条件下培养24h，然后将富集后的菌种按体积分数2～5％接种于好氧发酵培养液中进行好氧发酵培养，培养条件为：温度30～37℃，转速150～200rpm，通气速率1.0～1.2vvm，通入的空气过0.45μm滤膜进行过滤除菌，通过测定好氧发酵培养液表面张力值的变化确定复合型生物表面活性剂的产生以及好氧发酵培养时间；

B、取上述好氧发酵培养后的发酵液高速离心除菌，离心力为11000～12000×g，时间15～20min，用HCl溶液调节上清液pH1.5～2.0，然后在0～4℃下静置过夜，静置液再高速离心，离心力10000～12000×g，时间15～20min，取离心后的上清液于锥形瓶中加入乙酸乙酯，然后放在培养箱中以最大转速旋转振荡5～6min，倒于分液漏斗中静置分层，下层液收集后再次加入与上次同样体积的乙酸乙酯，按上述方法继续萃取，重复3次，收集上层液；

C、将上述收集的上层液于40～45℃下真空旋转蒸干，再冷冻干燥，即可得到复合型生物表面活性剂。

4.根据权利要求2或3所述的生产复合型生物表面活性剂的方法，其特征在于所述富集培养基成分为：NaCl 4.0～5.0g，蛋白胨4.0～5.0g，牛肉粉2.5～3.0g，蒸馏水1000mL，pH7.0～7.2。

5.根据权利要求2或3所述的生产复合型生物表面活性剂的方法，其特征在于所述发酵培养液组成为：葡萄糖40～45g，NH₄NO₃ 6.8～7.3g，K₂HPO₄·3H₂O 13.8～14.3g，NaH₂PO₄·H₂O 1.95～2.05g，MgSO₄·7H₂O 0.5～0.6g，MnSO₄·H₂O 0.036～0.04g，酵母膏0.5～0.6g，蒸馏水1000mL，pH7.0～7.2。

6.根据权利要求2或3所述的生产复合型生物表面活性剂的方法，其特征在于所述好氧发酵培养时间最好为24h。

7.根据权利要求2或3所述的生产复合型生物表面活性剂的方法，其特征在于所述V_上清液∶V_乙酸乙酯＝9∶4～10∶3。