[发明专利]蔗糖测定试剂盒及蔗糖的浓度测定方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种蔗糖测定试剂盒，同时本发明还涉及测定蔗糖浓度的方法，属于食品检验测定技术领域。

背景技术

当前，蜂蜜掺假的现象严重，据调查，在基层收购的蜂蜜中，出现的掺假的样品中，蔗糖的含量多在10-28％之间，有的甚至高达50％以上。另外，在中、低档茶叶加工时掺糖，以增加重量谋取不法利益的现象也比较普遍。无糖食品查出含有蔗糖的问题，也时有所闻，对糖尿病患者造成危害。

申请专利号200510099310.4的一种甘蔗汁中蔗糖含量的检测方法，公开一种蔗糖的测定方法，其方法包括蔗糖的水解，还原糖与铁氰化钾的反应，亚铁氰化钾的电位滴定等步骤。

由于用常规的滴定法测定蔗糖含量过程繁琐，准确性差，也有利用高效液相色谱仪对样品进行检测。

中华人民共和国国家标准GB 5009.8-85公布了食品中蔗糖的测定方法，其原理为：样品经除去蛋白质后，其中蔗糖经盐酸水解转化为还原糖，再按还原糖测定。水解前后还原糖的差值为蔗糖含量。本国家标准由全国卫生标准技术委员会食品卫生标准分委员会提出，由卫生部食品卫生监督检验所归口。本国家标准由卫生部食品卫生监督检验所负责起草。

发明内容

本发明要解决的技术问题是：提出一种利用酶比色法(EnzymaticColorimetric Method)及酶(偶)联法(Couple Reaction)技术，计量/连续监测还原型烟酰胺辅酶(还原型辅酶)在340nm波长处吸光度的变化，得以测定蔗糖浓度的方法，同时，本发明还将给出用以实现该方法的蔗糖测定试剂盒，采用该试剂不仅可以在紫外/可见光分析仪或半、全自动生化分析仪上进行蔗糖浓度测定，而且测定速度快、准确度高，因而可以得到切实的推广应用。

本发明蔗糖浓度测定方法原理如下：

蔗糖蔗糖酶D-葡萄糖+D-果糖

D-果糖+辅酶果糖脱氢酶脱氢果糖+还原型辅酶

这种方法应用蔗糖酶(sucrase；EC 3.2.1.48)偶联果糖脱氢酶(Fructosedehydrogenase；EC 1.1.1.124；EC 1.1.99.11)酶促反应速率比色法/终点法。蔗糖酶酶解蔗糖反应产生果糖，再通过偶联果糖脱氢酶的作用，最终将辅酶(在340nm处没有吸收峰)还原成为还原型辅酶(在340nm处有吸收峰)，从而得以测定还原型辅酶在340nm处吸光度上升的程度/速度，通过测量340nm处吸光度上升的程度/速度，可以测算蔗糖的浓度大小。

实验表明，从测定结果的准确性和配制成本的经济性两方面综合考虑，无论是单剂、双剂还是三剂，如下成分关系的本发明蔗糖测定试剂盒较为理想：

缓冲液      100mmol/L

稳定剂      500mmol/L

辅酶        3mmol/L

蔗糖酶        10000U/L

果糖脱氢酶    12000U/L

本发明的蔗糖测定试剂盒可以是单剂，包括：

缓冲液、稳定剂、辅酶、蔗糖酶、果糖脱氢酶。

试剂盒可以是干粉状态，在使用前加水溶解后使用；也可以配制成液体试剂，直接使用。

也可以将上述单剂试剂配成如下双剂试剂：

试剂1

缓冲液、稳定剂、辅酶。

试剂2

缓冲液、稳定剂、蔗糖酶、果糖脱氢酶。

辅酶、蔗糖酶、果糖脱氢酶在试剂1或试剂2中的位置可以不限。试剂盒可以是干粉状态，在使用前加水溶解后使用；也可以配制成液体试剂，直接使用。

还可以将上述单剂试剂配成如下三剂试剂：

试剂1

缓冲液、稳定剂、辅酶。

试剂2

缓冲液、稳定剂、果糖脱氢酶。

试剂3

缓冲液、稳定剂、蔗糖酶。

辅酶、蔗糖酶、果糖脱氢酶在试剂1、试剂2或试剂3中的位置可以不限。试剂盒可以是干粉状态，在使用前加水溶解后使用；也可以配制成液体试剂，直接使用。

无论是单剂、双剂还是三剂，本发明测定蔗糖浓度的方法，其辅酶可以是NADP⁺、NAD⁺或thio-NAD⁺中的一种。

具体实施方式

下面结合实施例子对本发明作进一步的说明。

实施例一

本实施例的蔗糖测定试剂为单试剂，包括：