[发明专利]重组鸡痘病毒疫苗rFPV－1218AIH5/N1及其构建方法、用途

说明书

技术领域

本发明涉及一种重组鸡痘病毒疫苗，特别是一种用鸡痘病毒新鉴定的复制非必需区构建同时表达H5亚型禽流感病毒HA和NA基因的重组鸡痘病毒疫苗。

背景技术

鸡痘病毒(Fowlpox Virus，简称：FPV)为痘病毒科、禽痘病毒属的成员，是迄今发现的动物病毒中最大的一种病毒。最独特的性质是它们在感染细胞的胞浆复制，而不在细胞核内。成熟的病毒粒子为砖型，大小为250×350nm，FPV的基因组为双股线性DNA，大小约300kb，分子量约为2～4×10⁵KD，G+C含量达35％，且其DNA不具有感染性。通过重组DNA技术，以FPV为载体研制禽类基因工程重组活病毒疫苗，或哺乳动物非复制型重组活病毒载体疫苗受到越来越多研究者的重视。FPV基因组宠大，可插入较长外源基因，构建多价或多联重组病毒活疫苗，诱导机体产生体液免疫和细胞免疫。FPV载体与已报道的病毒载体如痘苗病毒、乳头状瘤病毒、腺病毒、细小病毒、马立克氏病病毒、烟草花叶病毒等相比具有明显的优势。FPV自然条件下只感染禽类，但能在哺乳动物细胞产生顿挫性感染，虽不产生有感染性的子代病毒粒子，却能自动合成加工外源抗原并提呈到细胞表面，刺激机体产生免疫应答反应。

已有多种类型的具有生物活性的蛋白质在重组鸡痘病毒(recombinantfowlpox virus，rFPV)中得到表达。如禽流感病毒(即：AIV)的血凝素基因(HA)、新城疫病毒(NDV)的融合蛋白(F)和血凝素-神经氨酸酶(HN)基因、马立克氏病病毒(MDV)的gB基因、传染性法氏囊病病毒(IBDV)的VP2基因、狂犬病病毒糖蛋白和麻疹病毒融合蛋白基因等，以表达外源基因的rFPV进行免疫，在SPF鸡或无母源抗体的商品鸡均可提供特异性的免疫保护，因此，FPV载体不仅可以用作家禽的疫苗，而且可以用作哺乳动物的疫苗。

现有技术中，FPV疫苗在商品禽中已使用了70多年，此疫苗可引起轻微的、自限性局部感染。同时，FPV宿主范围较窄，仅感染禽，因此是相对比较安全的疫苗病毒。

鸡痘病毒载体已经研究了近二十年，但能应用于临床的重组病毒寥寥无几，原因何在？一个主要原因就是母源抗体的干扰。就拿我国的现状来说，为控制疫情的发生，减少经济损失，种鸡一般需要反复接种针对MDV、NDV、AIV、IBDV、FPV等的多种疫苗，导致我国的商品鸡普遍带有高母源抗体。其中针对H9N2亚型AIV的母源抗体高达2⁷-2⁸，H5N1亚型AIV的母源抗体也达到了2⁵-2⁶，这就给商品鸡疫苗的使用和疫情的监测带来不便。

Taylor等发现，在有较高ND母源抗体的试验鸡上，共表达NDV F和HN基因的重组FPV的抵抗NDV强毒攻击的免疫保护率较在SPF鸡上有所下降。因此，针对外源基因的抗体干扰了重组FPV的免疫(Taylor J，Christensen L，Gettig R，et al.Efficacy of a recombinant fowlpox-basedNewcastle disease virus vaccine candidate against velogenic and respiratorychallenge.Avian Dis，1996，40(1)：173-80.)。本室共构建的9个表达HPAIV基因的rFPVs无论是否能够诱导HI抗体，在SPF鸡上均能抵抗强毒AIV的攻击，免疫保护率均为100％，构建的3个共表达HPAIV和MPAIV HA基因的重组苗在SPF鸡上均能抑制MPAIV的排出，免疫效力与油苗相当。而在带有高水平AIV母源抗体的商品鸡上，保护率均有不同程度的下降。表明针对外源蛋白的母源抗体对重组FPV的免疫效力确实存在一定的影响。另有构建的NDV的主要保护性抗原的重组病毒疫苗进行的商品鸡试验试验结果也表明，重组FPV的免疫效力因存在针对NDV或AIV的母源抗体而受到很大的影响(丁炜东，曹丽萍，张体银等.表达新城疫病毒F和HN基因重组鸡痘病毒疫苗的遗传稳定性和免疫效力试验.中国兽医杂志，2005，41：10-14.韦栋平，刘玉良，邵卫星等.共表达新城疫F基因和H9亚型禽流感病毒HA基因的重组鸡痘病毒.微生物学报，2004，44：14-18.)。