[发明专利]一种用于蛋白质样品富集及与毛细管电泳分析联用的方法

说明书

技术领域

本发明涉及低丰度蛋白质样品富集与检测方法，具体地说是一种用于 蛋白质样品富集与毛细管电泳分析联用的方法。

背景技术

毛细管电泳现在已经成为一种常规的分离方法，在化学、生物学等领 域应用广泛。但是由于毛细管的光程短，所以毛细管电泳的检测灵敏度较 低。尽管采用激光诱导荧光检测可以降低毛细管电泳的检测限，但是蛋白 质的荧光标记过程繁琐，而且仪器价格昂贵。因此，发展用于蛋白质样品 富集与毛细管电泳分析联用的方法，对于提高毛细管电泳的检测灵敏度是 非常必要的。

目前，已报道了多种毛细管电泳的样品富集方法。其中场放大进样 (FASS)[1，2]是基于样品缓冲液和电泳缓冲溶液电导率的差异而产生的样 品区带压缩。但是，当样品缓冲液的电导率高于电泳缓冲液时，样品则无 法通过场放大进样富集。等速电泳(ITP)是将样品区带夹在前导缓冲液与 尾随缓冲液之间的一种样品富集方法[3，4]。但是，ITP不能同时对阳离子 与阴离子进行富集与分离。此外，还有等电聚焦[5]、基于半通透性中空纤 维膜的电堆积[6]和基于刻蚀毛细管的电堆积[7]等方法。

[1]Burgi，D.S.，Chien，R.L.Anal.Chem.1992，64，1046-1050.

[2]Burgi，D.S.Anal.Chem.1993，65，3726-3729.

[3]Krivankova，L.；Gebauer，P.；Bocek，P.J.Chromatogr.A 1995，716，35-48.

[4]Foret，F.；Szoko，E.；Karger，B.L.Electrophoresis，1993， 14，417-428.

[5]Hjerten，S.；Liao，J.L.；Zhang，R.J.Chromatogr.A 1994，676， 409-420.

[6]Wu，X.Z.；Hosaka，A.；Hobo，T..Anal.Chem.1998，70， 2081-2084.

[7]Wei W.，Edward，S.Y.，Anal.Chem.2002，74，3899-3905.

发明内容

本发明的目的在于提供一种用于蛋白质样品富集及与毛细管电泳分析 联用的方法。利用此方法可以对低浓度蛋白质样品进行富集，并通过毛细 作用的进样方法实现样品富集与毛细管电泳分离分析的联用。

一种用于蛋白质样品富集及与毛细管电泳分析联用的方法，其特征在 于：所述的用于蛋白质样品富集及与毛细管电泳分析联用的方法，包括蛋白 质样品的富集(图1，A)、富集后样品的推出(图1，B)、分离毛细管在毛 细作用下进样(图1，C)和毛细管电泳分析(图1，D)；

联用系统包括恒流泵(A0)、膜接口(A1)、聚四氟乙烯管(A2)、硅橡胶 (A3)和分离毛细管(A4)；用于蛋白质样品富集的膜接口(图1，A1；图2) 包括连接毛细管(1)、中空纤维膜(2)、盛装缓冲液的离心管(3)、固定 连接毛细管的聚四氟乙烯管(4)以及加入与取出缓冲液的开口(5)；

富集样品时，先将膜接口(A1)的中空纤维膜与连接毛细管(1)中充满 样品，再将膜接口(A1)出口端的连接毛细管(1)用硅橡胶堵死，最后使用 恒流泵将样品不断推入到膜接口(A1)中；由于蛋白质大分子无法透过中空 纤维膜(2)而达到富集效果；富集结束后，取下硅橡胶(A3)，用恒流泵将 富集后的样品从膜接口(A1)中推出，样品进入到聚四氟乙烯管中；将分离 毛细管(A4)插入到聚四氟乙烯管(A2)，样品在毛细作用下进入分离毛细 管(A4)的进样端；进样结束后，将分离毛细管(A4)两端插入到缓冲液 中，施加电压，进行电泳。

本发明提供的用于蛋白质样品富集与毛细管电泳分析联用的方法，其 特征在于：所述恒流泵(A0)的流量为0.5-2.5μL/min。

本发明提供的用于蛋白质样品富集与毛细管电泳分析联用的方法，其 特征在于：所述的膜接口(A1)的中空纤维膜(2)为醋酸纤维素膜，内径为 100～400μm，截留分子量为3000～8000Da，有效长度为2cm-4cm。

本发明提供的用于蛋白质样品富集与毛细管电泳分析联用的方法，其 特征在于：所述的膜接口(A1)的连接毛细管(1)内径与外径要与醋酸纤维 素膜内径相匹配，以保证连接毛细管(1)可以穿入膜中。