[发明专利](2S,5S)－2,5－己二醇的生物不对称合成方法

权利要求书

1、一种(2S，5S)-2，5-己二醇的生物不对称合成方法，包括如下步骤：

(1)菌种的确定：选取对2，5-己二酮的羰基具有高还原活性的HD-5酵母菌株进行保存，其中HD-5酵母菌株用于生物转化时的培养方式分为游离酵母细胞和固定化酵母细胞；

(2)细胞制备：首先进行种子培养：挑取斜面保存菌种的培养物，接种于含有葡萄糖、蛋白胨的种子培养基中，摇瓶培养，取含酵母细胞的培养液离心，培养方式为游离酵母细胞时，取湿菌体，4℃保存备用；当培养方式为固定化酵母细胞时，需将含酵母细胞的培养液离心后，用0.9％的生理盐水洗涤两次，称其湿重，然后按一定比例加入到海藻酸钠溶液中，充分搅匀后，滴入到CaCl₂的溶液中，待形成球状颗粒稳定后，收集颗粒，4℃保存备用；

(3)酵母细胞的生物转化：将湿菌体或固定化细胞接种于培养基中，振荡培养，活化2h后，加入底物2，5-己二酮，使终浓度为10-60mmol·L^-1，在一定温度、pH值、搅拌转速、反应时间和葡萄糖浓度下，进行底物2，5-己二酮的生物还原反应。

2、如权利要求1所述的(2S，5S)-2，5-己二醇的生物不对称合成方法，其特征在于：所述步骤3中的培养基采用有机培养基、无机培养基、蒸馏水培养基、磷酸盐缓冲培养基、Tris-盐酸缓冲培养基中的一种。

3、如权利要求2所述的(2S，5S)-2，5-己二醇的生物不对称合成方法，其特征在于：所述的有机培养基组成包括：葡萄糖10.0g·L^-1，蛋白胨5.0g·L^-1，K₂HPO₄1.0g·L^-1，ZnSO₄ 0.01g·L^-1，KCl 0.5g·L^-1，Fe₂(SO₄)₃0.01g·L^-1，MgSO₄·7H₂O 0.5g·L^-1。

4、如权利要求2所述的(2S，5S)-2，5-己二醇的生物不对称合成方法，其特征在于：所述的无机培养基组成包括：葡萄糖5.0g·L^-1，(NH₄)₂SO₄5.0g·L^-1，K₂HPO₄ 1.0g·L^-1，ZnSO₄ 0.01g·L^-1，KCl 0.5g·L^-1，Fe₂(SO₄)0.01g·L^-1，MgSO₄·7H₂O 0.5g·L^-1。

5、如权利要求1所述的(2S，5S)-2，5-己二醇的生物不对称合成方法，其特征在于：所述的磷酸盐缓冲培养基中的磷酸盐浓度为0.2mol·L^-1，含葡萄糖5.0g·L^-1。

6、如权利要求1所述的(2S，5S)-2，5-己二醇的生物不对称合成方法，其特征在于：所述的Tris-盐酸缓冲培养基中的Tris-盐酸浓度为0.05mol·L^-1，含葡萄糖5.0g·L^-1。

7、如权利要求1所述的(2S，5S)-2，5-己二醇的生物不对称合成方法，其特征在于：所述的蒸馏水培养基组成为含葡萄糖5.0g·L^-1的蒸馏水。

8、如权利要求1所述的(2S，5S)-2，5-己二醇的生物不对称合成方法，其特征在于：所述步骤3中的菌体接种量按菌体干重计算为1-10％，温度恒定在28-35℃，pH值为5.0-7.0，搅拌转速为150-300r·min^-1，葡萄糖浓度控制在0.01-0.3g·L^-1，生物还原反应时间为48-72h。

9、如权利要求1所述的(2S，5S)-2，5-己二醇的生物不对称合成方法，其特征在于：所述步骤3中的底物投加采用一次性投加法或分批补料法。