[发明专利]猪繁殖与呼吸综合症病毒弱毒疫苗株及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种弱毒疫苗株，尤其涉及一种猪繁殖与呼吸综合症病毒弱毒疫苗株及其应用，属于生物技术领域。

背景技术

猪繁殖与呼吸综合征(Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome，PRRS)是由PRRSV引起的，以繁殖障碍、呼吸道症状为特点的，具有高度传染性的病毒病。1987年美国首先发现该病，Wensvoort等于1991年分离并鉴定了该病病原，PRRSV归属于动脉炎病毒科(Arteriviridae)的动脉炎病毒属，是一种有囊膜的正链单股RNA病毒，由于PRRSV具有抗原漂移和变异的特性，并且它的主要靶细胞是具有重要免疫作用的肺泡巨噬细胞(PAM)，因此PRRSV的感染常伴有各种病原的继发感染，尤其是呼吸道病原。目前已给养猪业造成重大损失，引起了国际上的广泛关注。为了控制该病的发生和蔓延，开展PRRS的疫苗的研究显得尤为重要。国外先后研制出了预防PRRS的灭活苗和弱毒苗，并在预防和防制PRRS的发生和蔓延上发挥了巨大的作用。

近年来PRRS已在我国蔓延开来，严重阻碍了我国养猪业的发展，引起了我国有关部门的重视。1996年中国农业科学院哈尔滨兽医研究所首次在国内分离和鉴定了该病病原，同时建立了IFA检测方法，经普查PRRS已遍布我国大部分的省市自治区，因此针对国内流行毒株的疫苗的研究显得十分迫切。虽然国外已经研制出了商品化的灭活苗和弱毒苗，但由于该病毒具有抗原变异和漂移的特性，因此国外疫苗的针对性相对较差，往往免疫效果并不理想，且国外已有报道，因使用PRRS弱毒苗而引起该病的爆发。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是克服现有技术的不足，提供一株新的猪繁殖与呼吸综合症病毒弱毒疫苗株，该弱毒疫苗株遗传稳定、安全性好，对于猪繁殖与呼吸综合症病毒具有良好的免疫原性。

本发明所要解决的技术问题是通过以下技术途径来实现的：

本发明选用国内分离毒株PRRSV CH-1a株，在Marc-145细胞上低温传代后，再在37℃传到第110～170代时，进行全面鉴定，检测其纯净性TCID₅₀、毒力和免疫原性测定，并通过RT-PCR试验和对各代次的病毒的ORF5进行RFLP分析，证明110～170代PRRSV CH-1a种毒除其在Marc-145细胞上的病毒滴度有很大提高和致病性明显降低外，其它特性基本与低代次PRRSV CH-1a毒株特性相一致，将110～170代PRRSV CH-1a致弱毒株种毒(Porcine Reproductive and Respiratory Syndromevirus)命名为PRRSV CH-1R株，其微生物保藏号是：CGMCC NO.1883；保藏时间是：2006年12月11日；保藏单位：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心；保藏地址：北京市海淀区中关村北一条13号，中国科学院微生物研究所。

把110代PRRSV CH-1a株定义为PRRSV CH-1R株1代，把PRRS活疫苗(CH-1R株)原始种子代次定义为PRRSV CH-1R株25～35代(PRRSV CH-1a株135～145代)；基础种子代次为36～45代(PRRSV CH-1a株146～155代)；生产种子代次为46～55代(PRRSV CH-1a株156～165代)。

免疫原性试验表明，用本发明弱毒株免疫仔猪后，所免疫仔猪均能抵抗猪繁殖与呼吸综合症病毒强毒的攻击。

本发明弱毒株的安全性好，毒力测定试验结果表明，本发明弱毒株对妊娠母猪、仔猪等各年龄猪只均安全，无致病力。

通过RFLP的分析表明，PRRSV CH-1a株通过低温连续传代和多次克隆，当传至110代在PRRSV ORF5发生稳定的点突变，该突变稳定保持到170代，说明本发明弱毒株是一株具有稳定遗传变异的致弱毒株。

本发明弱毒株湿毒在-20℃的保存期为12个月，在-70℃的保存期为24个月；本发明弱毒株冻于毒在-20℃和-70℃的保存期为24个月。

本发明疫苗的使用方法：

(1)接种途径：颈部肌肉注射。

(2)接种剂量：仔猪在3～4周龄免疫，每头颈部肌肉注射疫苗1头份；母猪于配种前1周免疫，每头颈部肌肉注射疫苗2头份。

本发明弱毒株应用范围较宽，例如，可应用于制备成诊断繁殖与呼吸综合症病毒的诊断试剂，还可应用于制备成单苗或联苗(活或灭活疫苗)疫苗等。

附图说明

图1PRRSV CH-1a株传代次数与病毒滴度关系。