[发明专利]病原体的多元定量检测

权利要求书

1.分析怀疑含有多种预定病原体中任何种的样品以检测病原体特异性靶标的方法，所述方法包括：

a)选择对应于所述多种预定病原体中每一种病原体的病原体特异性引物对，其中所述病原体特异性引物对能够介导从相应病原体的核酸病原体特异性靶标中扩增选定的已知长度多核苷酸扩增子；

b)在促进多核苷酸扩增子扩增的条件下，在扩增步骤中将来自所述怀疑含有多种预定病原体中任意种之样品的核酸与多种病原体特异性引物对在反应混合物中接触。

c)在扩增步骤期间以一个或多个间隔取出反应混合物的等分试样；

d)分离每个等分试样中的扩增子；和

e)检测每个等分试样中的扩增子。

其中，检测到一种或多种选定的已知长度扩增子指示样品中含有该扩增子相应的病原体特异性靶标。

2.权利要求1的方法，其还包括定量所检测到的扩增子以及建立所检测扩增子的量与样品中存在的病原体量之间的相关性。

3.权利要求1或2的方法，其中所述扩增步骤包括通过聚合酶链式反应(PCR)进行扩增。

4.权利要求1至3中任一项的方法，其中所述来自样品的核酸在扩增步骤前进行逆转录(RT)。

5.权利要求1至4中任一项的方法，其中步骤(c)的扩增子通过毛细管电泳进行分离。

6.权利要求1至5中任一项的方法，其中所述一种或多种病原体特异性引物包含可检测标记。

7.权利要求1至6中任一项的方法，其中所述扩增子通过包含可检测标记的核酸结合染料进行检测。

8.权利要求6或7的方法，其中所述可检测标记选自荧光标记、放射性标记、比色标记、磁性标记和酶标记。

9.权利要求6至8中任一项的方法，其中所述可检测标记是荧光标记。

10.权利要求6至9中任一项的方法，其还包括通过对反应混合物等分试样中可检测标记的量进行定量，从而定量样品中病原体的量。

11.权利要求1至10中任一项的方法，其中所述病原体选自病毒、细菌、原生动物及其组合。

12.权利要求1至11中任一项的方法，其中所述多种特异性病原体靶标包括以下的特异性病毒靶标：HSV1、HSV2、EBV、CMV、HHV6、HHV7、HHV8、VZV、丙型肝炎病毒、乙型肝炎病毒、腺病毒、EEEV、WNE、JCV和BKV。

13.权利要求1至12中任一项的方法，其中所述方法能够检测样品中至少两种病原体。

14.权利要求1至12中任一项的方法，其中所述方法能够检测样品中至少3种病原体。

15.权利要求1至12中任一项的方法，其中所述方法能够检测样品中至少4种病原体。

16.权利要求1至12中任一项的方法，其中所述方法能够检测样品中至少5种病原体。

17.权利要求1至12中任一项的方法，其中所述方法能够检测样品中至少6种病原体。

18.权利要求1至12中任一项的方法，其中所述方法能够检测样品中至少8种病原体。

19.权利要求1至18中任一项的方法，其中所有病原体特异性引物对能够在至少一组共同的反应条件下促进多核苷酸扩增。

20.权利要求1至19中任一项的方法，其中所述样品是病原体宿主样品。

21.权利要求20的方法，其中所述宿主是哺乳动物。

22.权利要求20或21的方法，其中所述宿主是人。

23.权利要求20至22中任一项的方法，其中所述宿主是免疫受损的人。

24.权利要求23的方法，其中所述免疫受损的个体已接受移植。

25.权利要求23的方法，其中所述免疫受损的个体已接受治疗癌症的化学治疗。

26.权利要求23至25中任一项的方法，其中所述方法用于监测免疫抑制治疗的过程。

27.权利要求22至26中任一项的方法，其中所述宿主是对病原体感染无症状的人。