[发明专利]来自脐带血的具有Oct4表达能力的多能成体干细胞及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及来自脐带血的具有Oct4表达能力的多能成体干细胞及其制备方法，更具体地，涉及一种将脐带血来源的单核细胞通过在含有bFGF(基本成纤维细胞生长因子)和人血清或者血浆培养基中培养分离来得到的多能成体干细胞。 

背景技术

虽然在我们的现代社会中由于生命科学和医学的发展，过去的许多疾病已经被治愈，仍存在一些根深蒂固的疾病或者不可治愈的疾病诸如缺血性坏死、癌症、痴呆和严重烧伤等疾病。此外，在器官移植领域存在许多问题。作为治疗引起这些疾病的根源的治疗方法，这些细胞治疗已经成为目前引人注目的中心。 

细胞治疗是通过外部增殖或者分选自体同源干细胞、异源干细胞或者异种干细胞来治疗或者防止疾病的方法，或者其他方法诸如改变细胞的生物学特性的方法。细胞治疗在根深蒂固疾病和不可治愈的疾病治疗方面具有无穷的可能性，因为其具有非常宽的应用领域，例如使从患者自身、其他人或者其他动物收集的体细胞增殖或者将干细胞分化成所需的细胞类型以便在疾病治疗中使用。 

已经报道，当成骨细胞、内皮祖细胞或者骨髓干细胞被移植到受损心肌中时，心肌的功能得到改善(Menasche，P.等人，J.Am.Coll.Cardiol.，41：1078，2003；Strauer，B.E.等人，Circulation，106：1913，2002；和Stamm，C.等人，Lancet，361：45，2003)。这种心肌功能的改善是由于  通过干细胞分泌的动脉性细胞因子而形成机械支架，或者由于其他有益细胞聚集到缺血区域中(Orlic，D.等人，Circ Res，91：1092，2002)。 

同时，术语“干细胞”指的是不仅具有自我复制能力而且具有能分化成不同细胞类型的细胞，并可被分类成全能干细胞、多能性(pluripotent)干细胞和多能(multipotent)干细胞。 

全能干细胞是具有全能分化特性的细胞，它们能够形成完整的有机体，该性质由在卵子被精子受精后到8细胞期的细胞所具备。当这些细胞被分离并移植到子宫中时，他们可形成完整的有机体。 

多能性干细胞是能够形成来源于外胚层、中胚层和内胚层的各种细胞和组织的细胞，多能性干细胞来自定位在受精4-5天后产生的胚泡内的内部细胞团。这些细胞被称为“胚胎干细胞”，并可分化成各种其他组织细胞，但不能形成新的活体组织。  

多能干细胞是仅能正常分化成对含有它们的来源组织和器官特异的细胞，多能干细胞不仅在胎儿、新生儿和成体阶段的各种组织和器官的生长和发育中涉及，而且还在保持成体组织的内环境平衡和当组织损伤时诱导再生的功能中涉及。组织特异性多能细胞统称为“成体干细胞”。 

到目前为止已知的脐带血来源的成体干细胞包括能够分化成骨或骨骼肌的间质干细胞(Lee，O.K.等人，Blood，103：1669，2004；Gang，E.J.等人，BBRC，321：102，2004；Gang，E.J.等人，干细胞，22：617，2004)、能够分化成心脏细胞的心脏干细胞(US 2004/0126879)和内皮祖细胞(Yamamoto，K.等人，Arterio.Thromb.Vasc.Biol.，24：192，2004)。 

尤其是，已经知道骨髓中包含有许多成体干细胞，并且成体干细胞仅能分化成骨、软骨、脂肪等等，因为其来自胚胎期的中胚层。但是，已经发现成体干细胞还可分化成来自外胚层的神经细胞，因此，人们希望在疾病治疗中具有非常广泛的应用领域范围。 

但是，由于干细胞能够分化成有限种类的细胞类型，包括由间叶细  胞分化成骨或骨骼肌，由心脏干细胞分化成心脏细胞以及由内皮祖细胞分化成血管内皮细胞，难以将这些细胞定义为真正的多能干细胞。 

因此，本发明的发明人已经尝试将脐带血     来源的单核细胞通过在含有bFGF和人血清或者血浆的培养基中培养分离来获得成体干细胞，结果发现，成体干细胞具有极好的附着能力，可表达作为胚胎干细胞特异性标记物的Oct4，并可分化成各种组织诸如成骨细胞和神经细胞，由此完成本发明。 

发明内容

本发明的一个目的在于提供通过使用含有bFGF和人血清或血浆的培养基分离具有表达Oct4的能力的多能成体干细胞，其来自脐带血。 

本发明的另一目的在于提供用于制备成体干细胞的方法，该方法包括下列步骤：在含有bFGF和人血清或血浆的培养基上培养来自脐带血的单核细胞，并回收成体干细胞，其中成体干细胞显示下列特性： 

(a)具有表达Oct4的能力；