[发明专利]血小板反应蛋白－1的衍生肽以及治疗方法

说明书

与相关申请交叉参考

本申请要求2005年6月24日提交的U.S.临时申请系列号60/693,574 的权益。

技术领域

本发明涉及利用基质细胞蛋白(matricellular protein)血小板反应蛋 白-1(thrombospondin-1，TSP-1)及相关组合物的治疗，其用于稳定 动脉粥样硬化斑块，由此降低导致如心肌梗死、中风和急性肢体缺血的 斑块破裂事件的发生。此外，本发明涉及用于在多种情况下(包括上述 疾病状态)稳定斑块的多种肽，包括某些合成肽。

背景技术

可危及生命的动脉粥样硬化并发症如急性心肌梗死和中风是由诱 发局部血管炎症的胆固醇及其氧化磷脂的长期沉积所引起[1]。动脉壁中 的动脉粥样硬化病变部分地通过其细胞与胞外基质(ECM)组分之间 的相互作用而形成和发展[1，2]。发生动脉粥样硬化时，血管壁的细胞组 分及ECM组分均发生改变。公认ECM是影响动脉粥样硬化病变内细 胞行为的细胞结合蛋白及生长因子库[3，4]。对这些过程进行调节可能进 而对细胞-细胞以及细胞-ECM相互作用有直接影响，这又可能进而影响 动脉粥样硬化斑块的表型，因为这可能涉及其破裂倾向以及后继的下游 事件，如心肌梗死和中风。

为细胞提供关于其环境的特定背景(contexual)信息的ECM次要 蛋白组分已命名为“基质细胞”蛋白[4]。基质细胞蛋白与其他ECM组 分、多种特异性细胞表面受体以及生长因子相互作用，以调节细胞-基 质相互作用。这些蛋白质调节细胞功能，但是看来并不像其他ECM组 分如原纤维、胶原和弹性蛋白那样直接影响结构的组织或物理特性[5]。 这些蛋白质在细胞外基质与细胞表面之间的界面处发挥功能，以调节细 胞行为。此外，结构蛋白对正常的血管发育具有关键作用，然而基质细 胞蛋白在成人血管中却仅在受到损伤时表达[6]。特别地，这些细胞的主 要功能似乎是在组织修复中，并发挥背景作用，以通过调节细胞-基质 相互作用来影响细胞功能。因此，在种系中定向破坏结构性ECM蛋白 导致严重或致死的表型，然而敲除编码基质细胞蛋白的基因却产生表观 正常或轻微变化的表型[7-11]。

TSP-1是具有多个结合结构域的原型基质细胞蛋白[3，12]。TSP-1在 受到损伤时被诱导。该蛋白无效突变的纯合小鼠没有显著的发育缺陷； 这些小鼠中主要的表型是肺中的急性和机化性肺炎斑。然而，在多种疾 病模型中，这些小鼠产生明显的表型[10]。例如，在创伤修复模型中， TSP-1缺乏与炎性细胞应答的改变以及创伤愈合延迟有关。其他研究已 经显示TSP-1抑制血管发生[13-19]。因此，在瘤性细胞中定向表达TSP-1 具有临床意义，其改良形式目前正接受评估用于II期临床试验[20]。

就冠心病而言，最近的相关性研究和描述性研究提出，TSP-1在动 脉粥样硬化和心肌梗死中具有作用(尽管尚不明确)[21，22]。首先，病 例对照的遗传变异研究提出，该基因中的错义“突变”与动脉粥样硬化 和心肌梗死二者风险的提高相关[21]。其次，使用人类样品的病理学研 究显示，TSP-1在动脉粥样硬化病变中存在，而在天然血管壁中则不然 [23，24]。然而，目前动脉粥样硬化表型的斑块内TSP-1表达的意义仍然 未知。

发明内容

本发明提供利用TSP-1和相关组合物稳定动脉粥样硬化斑块和降低 动脉粥样硬化病变破裂倾向(可以在任何血管床中，例如冠脉、脑部或 外周四肢)的方法。本发明还提供利用TSP-1和与TSP-1有关的相关 肽(包括某些合成肽)的组合物。这些肽在多种情况下(包括疾病状态， 如心肌梗死、中风和急性肢体缺血)具有稳定斑块的效用。这些肽中的 一些包含与调节如TGF-β1和MMP-9活性的TSP-1活性位点相关的一 个或多个序列。

在某些实施方案中，本发明提供已发现影响MMP-9活化的肽序列 (基于TSP-1)。我们推测，其活性机制是通过TSP-1上独特的β2整合 素结合位点，它与MMP-9结合动脉粥样硬化病变中白细胞(主要是单 核细胞)的能力竞争。此外，在某些实施方案中，本发明提供已知调节 TGF-β1活性的基于TSP-1中序列的肽序列。这些序列可用于稳定斑块。 最后，我们提供基于上文讨论的活性位点的多种特定的合成肽，它们在 体内模仿TSP-1的TGF-β1和MMP-9活性及其斑块稳定效应。