[发明专利]用于遗传免疫的载体和方法

权利要求书

1.一种用于调节个体对表达载体的反应的方法，该方法包括以下步骤：

a.将一个或多个编码蛋白质或肽的基因克隆入含有一个或多个RNA元件的表达载体，和

b.递送所述表达载体至真核细胞，和

c.评价载体递送后的基因表达或免疫反应或保护，

从而所述RNA元件的使用实现了提高的基因表达和/或提高的免疫反应。

2.如权利要求1所述的方法，其中所述载体是病毒载体。

3.如权利要求1所述的方法，其中所述载体是非病毒载体。

4.如权利要求1所述的方法，其中所述载体是质粒。

5.如权利要求1所述的方法，其中所述载体是pDNAVACCUltra质粒。

6.如权利要求1所述的方法，其中所述RNA元件选自：免疫刺激RNA、促进程序性细胞死亡的RNA、抑制程序性细胞死亡的RNA、促进坏死细胞死亡的RNA、促进质粒核定位的RNA、促进启动子表达的RNA、结合配体的RNA、钝化基因的短发夹RNA、促进抗原交叉呈递的RNA、改变细胞表达以定制和增强蛋白质表达或免疫反应的其他RNA或其组合。

7.如权利要求1所述的方法，其中所述RNA元件用以避免生成至少一种获得性免疫反应。

8.如权利要求1所述的方法，其中所述RNA元件用以促进一种或多种先天免疫反应。

9.如权利要求1所述的方法，其中所述RNA元件用以预防插入诱变和/或避免恶性转化。

10.如权利要求1所述的方法，其中所述RNA元件与一种或多种转录物结合以改变超过一种细胞功能或途径。

11.如权利要求1所述的方法，其中所述RNA元件选自生成下述物质的那些RNA元件：单链RNA、双链RNA、发夹RNA、微RNA、RNA适体或核酶或其组合。

12.如权利要求1所述的方法，其中所述个体是哺乳动物、鸟或鱼。

13.一种用于确定引发免疫反应的靶抗原组合物的方法，该方法包括以下步骤：

a.将靶抗原克隆入含有两种或多种表达载体的载体家族，所述表达载体各自为所述抗原指定了不同的细胞内靶向，和

b.使用1种或多种载体的混合物初次免疫，且

c.使用1种或多种载体的混合物加强免疫，其中各组在所述初次免疫中接受第一载体，并在所述加强免疫中接受相同或不同的载体，和

d.评价免疫后的免疫反应或保护，

从而所述载体家族的使用实现了引发免疫反应的抗原组合物的快速确定。

14.如权利要求13所述的方法，其中在初次免疫或加强免疫中使用了两种或多种载体的混合物。

15.如权利要求13所述的方法，其中所述载体是病毒载体。

16.如权利要求13所述的方法，其中所述载体是非病毒载体。

17.如权利要求13所述的方法，其中所述载体是质粒。

18.如权利要求13所述的方法，其中所述载体家族靶向抗原至i)分泌的，ii)分泌-膜锚定的，iii)细胞内，iv)内体，v)增强的蛋白体加工或vi)交叉呈递的目的地。

19.如权利要求13所述的方法，其中所述分泌通过所述抗原的天然分泌信号、TPA或其他分泌信号所指定。

20.如权利要求13所述的方法，其中所述初次免疫和加强免疫使用不同的递送方法。

21.如权利要求13所述的方法，其中进行多次加强免疫。

22.如权利要求13所述的方法，其中所述个体是哺乳动物、鸟或鱼。

23.一种关于DNA疫苗质粒的组合物，该组合物包括：

a.pMB1或CoIE1衍生的可操作连接至卡那霉素抗性基因的复制起始点，

其中各单元的转录是分支的，从而与其他方向相比，提高了细菌培养物中的质粒产率。