[发明专利]食源性寄生虫病快速酶免疫检测方法及检测盒

说明书

技术领域

本发明涉及一种食源性寄生虫病快速酶免疫检测方法及检测盒。

背景技术

众所周知，食源性寄生虫病(FOOD SOURCE PARASITEDISEASES)是一组可以通过食物传播的常见寄生虫病，主要包括猪囊虫、肺吸虫、肝吸虫、旋毛虫四种寄生虫病。它们可以感染人体以及家畜，严重损害人类健康并造成畜牧业的经济损失。其中，猪囊虫可以引起癫痫、瘫痪、失明；肺吸虫可以导致肺囊肿、肺脓肿；肝吸虫可以引起胆道感染、胆结石、肝硬化；旋毛虫则可以引起严重的过敏反应及心脏损害。食源性寄生虫流行广泛，仅在中国广东省肝吸虫流行区人口就达到3000万以上。更值得注意的是，食源性寄生虫病的起病隐匿，症状不典型，易与其它疾病混淆，加之目前临床缺乏可靠实用的检测方法，因此，常常被漏诊误诊而贻误病情。

目前，食源性寄生虫病的检测方法有两大类：一类是传统检测方法，即查找病原体，由于这四种寄生虫多寄生在深部组织内，如脑部、眼球、肝脏胆道、肺部、骨骼肌、心肌等脏器，要通过外科手段采集虫体，不仅损伤甚大而且往往虫体分布散在常难以检获。另外旋毛虫、猪囊虫不排虫卵，肺吸虫排卵很少甚至不排卵；肝吸虫虽可以随粪便排卵，但卵体积微小且排卵不规律，难以检出，临床上常用的粪便涂片法敏感度一般低于50％。因此，无论查虫卵或虫体都不是诊断该组寄生虫病的有效手段；另外一类就是近年来出现的常规酶免疫法等，但这类方法普遍存在以下不足：1、操作时间长：时间多在长达2-4小时以上，难以适应现场与临床门诊的快速诊断需要；2、试剂操作烦琐：如酶结合物和底物液要临时配制，抗原需要过夜包被，样本稀释液体以及终止液体都需要用户自行配制，在应用中给用户带来了诸多不便；3、不稳定：所提供的试剂稳定性不佳，一旦配制必须在1周内甚至1天内用完，造成经济损失，也影响了检测的可靠性；4、配套不完整：迄今，在市场上尚未见到同时提供方法统一的四种食源性寄生虫成套试剂盒，所有试剂盒都只能测定一种寄生虫病。目前，所见到的供应单位供应品种不齐全，仅供应其中一种或两种，如中国某地一家公司仅提供囊虫检测试剂，同地区另一研究所则仅提供旋毛虫检测试剂。厂家的不同，方法的区别，性能的差异，不仅影响可操作性，更影响到结果的一致性和有效性，容易造成误诊或漏诊，成为食源性寄生虫病防治中一大隐患；5安全隐患：常规酶免疫方法常使用具有致畸性作用的OPD作为显色剂，并用强腐蚀性的硫酸作为终止液，对操作人员和环境构成威胁。综上所述，现有的检测技术不能有效满足食源性寄生虫病的诊断需要，不利于疾病的诊断治疗和预防控制。

发明内容

本发明的目的在于提供食源性寄生虫病快速酶免疫检测方法及与本方法配套用的成套检测盒。

为了达到上述目的，本发明提供了如下的技术方案：一种食源性寄生虫病快速酶免疫检测方法，用于猪囊虫、肺吸虫、肝吸虫和旋毛虫的酶免疫检测，该方法的酶免疫检测用试剂包括抗原包被板A、酶结合物液B、洗涤液C、底物D、显色剂E、样品稀释液F、终止剂G、阳性对照品H及阴性对照品I，检测过程使用多孔检测盒，具体过程包括：(1)样本稀释：用样本稀释液F将待检血清按体积比1∶50稀释，阴阳性对照血清同比例同步稀释，然后(2)加样反应：每孔加已稀释血清100ul，同时设阴性、阳性及空白对照各一孔，空白对照孔加入100ul样品稀释液F，37℃静置10分钟，甩去，每孔加洗涤液C一滴，立即用蒸馏水洗涤多次，甩去，拍干，再(3)加酶反应：加酶结合物B二滴，37℃反应10分钟，甩去，加洗涤液C一滴，立即用蒸馏水反复洗涤多次，甩去，拍干，最后(4)显色反应：加底物D和显色剂E各一滴，混匀，室温下放置2-3分钟，待阴性对照孔微呈蓝色时，加终止剂G一滴混匀，终止反应，肉眼观察浅于近于阴性对照为阴性，呈明显深于阴性对照的蓝色为阳性，用仪器判断：以空白对照调零于630nm读取O.D值，待检孔O.D值大于阴性对照2.1倍者为阳性，当阴性对照O.D值低于0.07时按0.07计算。

在具体检测过程中，必须注意如下问题：1、试剂盒在2-8℃下保存，每次取出时先平衡至室温后使用。滴瓶每次用后一定要将盖拧紧，各瓶盖之间切不可混用；2、洗涤时将蒸馏水加满孔内，每次停放三十秒钟，甩去孔内液体，禁用自来水等其它水源。