[发明专利]聚羟基烷酸－羟基烷氧基烷酸酯及其生物合成制备方法

权利要求书

1.聚-3-羟基丁酸-β-羟基乙氧基乙酸酯，其结构式如下：

其中x、y为正整数。

2.一种权利要求1所述的聚-3-羟基丁酸-β-羟基乙氧基乙酸酯的生物合成制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

1).采用分子生物学方法克隆用于生物合成聚-3-羟基丁酸-β-羟基乙氧基乙酸酯的β-酮硫解酶(phaA)、乙酰乙酰辅酶A还原酶(phaB)、PHA合酶(phaC)以及PEG降解酶的编码基因；

2).采用基因工程技术构建上述几种生物合成酶的表达载体并导入具有合成PHA能力的微生物中，得到重组菌株；

3).将重组菌株进行发酵，收集菌体，提取出聚-3-羟基丁酸-β-羟基乙氧基乙酸酯共聚物。

3.根据权利要求2所述的生物合成制备方法，其特征在于，步骤1)中的编码基因来自自然分离的能够合成聚羟基脂肪酸酯及能够降解PEG的微生物。

4.根据权利要求2所述的生物合成制备方法，其特征在于，步骤1)中用于克隆所述β-酮硫解酶(phaA)、乙酰乙酰辅酶A还原酶(phaB)、PHA合酶(phaC)所采用的微生物是假单包菌属(Pseudomonas)，，用于克隆PEG降解酶编码基因所采用的微生物是鞘脂单胞菌属(Sphingomonas)。

5.根据权利要求2所述的生物合成制备方法，其特征在于，步骤2)中所述的微生物是埃希氏菌属(Escherichia)、假单包菌属(Pseudomonas)、气单包菌属(Aeromonas)，其中优选大肠杆菌(E.Coli)或嗜水气单包菌(Aeromonashydrophila)。

6.根据权利要求2所述的生物合成制备方法，其特征在于，步骤1)中的编码基因通过PCR获得。

7.根据权利要求6所述的生物合成制备方法，其特征在于，所述PCR的引物是Pegdh1：5’-CC ATG GAC AAA TTC GAC TTT GTC GTG-3’，

Pegdh2：5’GG TAC CTA GGT GTAAGA TTC GGC TTC ATC-3’；

pha1：5’-TCTAGAAAGGGCCGTGCATGCGTGCTCACG-3’，

pha2：5’-AAGCTTTTCCAGGCCGCGCGAGCCACCGC-3’。

8.根据权利要求2所述的生物合成制备方法，其特征在于，步骤3)中所述的发酵的温度为25～45℃，发酵的pH值为6.0～8.0。

9.根据权利要求2所述的生物合成制备方法，其特征在于，步骤3)中所述的发酵方式是两步法流加分批发酵。