[发明专利]一种简易的鸡胚接种封口方法

说明书

技术领域：

本发明涉及病毒的鸡胚接种培养方法，特别提供了用于鸡胚接种封口的组合物。

背景技术：

鸡胚接种培养是病毒学的重要方法之一，来自禽类的病毒，均可在鸡胚中繁殖，哺乳动物的病毒如蓝舌病病毒、流感病毒等也可在鸡胚中增殖，鸡胚接种技术是被认为在流感尤其是禽流感病毒分离培养方法中最为经典适用的方法。针对目前禽流感病毒肆虐的严峻局势，有效快速的分离到病原，并降低实验过程中可能的风险，无疑会为禽流感病毒的防治、研究工作提供便利。

常规的鸡胚接种技术操作是：将9-10日龄鸡胚先用检卵灯检查鸡胚活力，并用铅笔画出气室和胚胎的位置及进针部位，在无菌条件下，先用打孔器打孔，然后采用尿囊腔接种、卵黄囊接种等方法将病料或病毒株接种于鸡胚，用液体石蜡封口后，置37℃培养箱继续孵化，弃24小时后死亡鸡胚，继续置37℃培养箱继续孵化至96小时，放置4℃冰箱过夜，最后无菌操作吸取尿囊液，检测HA效价，即为增殖培养的病毒样品。

对于“封口”这一步操作，传统鸡胚接种方法是用石蜡封口，操作过程是：必须事先将固体石蜡用酒精灯加热融化至液态，然后吸取一滴，滴在进针的孔上，待其凝固成固态后封住小孔，再如此进行下一个鸡胚的封口。此操作过程中需要一直用酒精灯对石蜡加热保温，耗时较长，而融化较劣质的石蜡时，容易产生刺鼻难闻的烟雾，造成实验室环境的污染；同时明火的存在，更是给实验室带来火灾的安全造成隐患。

发明内容：

本发明的目的在于提供一种鸡胚接种封口方法，通过一种新型的封口用材料替代石蜡封口，使得鸡胚接种的操作更为简单。

本发明具体提供了一种简易的鸡胚接种封口方法，其特征在于采用如下重量百分比成分的组合物作为封口剂：

乙酸乙酯  10～30

乙酸丁酯  20～40

硝基纤维素10～20

氨基树脂  15～35

樟脑      1～5

本发明简易的鸡胚接种封口方法中，封口剂中优选的组分为：

硝基纤维素12～16

氨基树脂  25～32

樟脑      2～4

本发明中的乙酸乙酯和乙酸丁酯作为一种混合的活性溶剂，用来溶解硝基纤维素等物质，这种按一定比例配制的组合液，具有合适的挥发性，一方面改善了组合物的干燥速度，另一方面使得成膜均匀。组分中的硝基纤维素作为一种成膜剂，可形成一层初级膜，它的粘度保证了组合物具有适当的流动性。本发明中还含有氨基树脂和樟脑，氨基树脂和樟脑的加入可降低纤维素膜的硬度，增强附着力和柔韧性。

在鸡胚接种封口操作时，采用本发明封口剂直接涂抹进针孔，涂抹后迅速薄膜封闭接种的部位。此方法简单易行，大大节省了操作时间和实验原料；同时也较好的避免了由酒精灯融化石蜡封口所带来的实验室空气污染和火灾安全隐患问题。用石蜡和本发明封口剂的利弊具体可见下表：

表1：石蜡和普通封口剂封口的利弊比较