[发明专利]PTD－酪氨酸羟化酶催化区域融合蛋白及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及基因工程和药学领域。具体地涉及蛋白转导域-酪氨酸羟化酶催化区域融合蛋白和应用。 

背景技术

由于血脑屏障的选择性通透作用，使许多治疗脑部疾病的药物不能直接到达脑部病变部位，限制了其对疾病的治疗。 

帕金森病(Parkinson’s disease，PD)是一种老年人常见的慢性进展性运动障碍性疾病，其临床表现以静止性震颤、肌强直、运动迟缓和姿势反射障碍为特征。PD的病理改变主要为黑质致密部多巴胺(Dopamine，DA)能神经元严重缺乏，其生化改变主要为黑质、纹状体DA递质减少。目前最有效的治疗措施是口服补充DA的前体物质左旋多巴，但一般服药3-5年后疗效显著下降并出现毒副作用。酪氨酸羟化酶是儿茶酚胺类活性物质生物合成的限速酶，其催化活性残基都位于其C-端的330个氨基酸中，在N-端的氨基酸中没有与催化活性有关的氨基酸。研究表明，蛋白转导域(protein transduction domain，PTD)能够有效地通过生物膜，将外源蛋白质与PTD连接后，能够进入细胞和通过血脑屏障。将PTD的转导特性应用于药物治疗疾病方面，具有重要的临床价值。 

本发明的目的，在于制备PTD-酪氨酸羟化酶催化区域融合蛋白，以期在临床治疗中，提高药物到达病变部位的量，更好地发挥治疗作用。 

发明内容

在一方面，本发明提供一种蛋白转导域-人酪氨酸羟化酶催化区 域的融合蛋白，其中的蛋白转导域能引导人酪氨酸羟化酶催化区域通过血脑屏障，从而使酪氨酸羟化酶催化区域在不需进行外科手术情况下到达脑部发挥活性。 

满足这一要求的蛋白转导域可以是HIV-1反式激活蛋白(trans-activator transcription，TAT)中的蛋白转导区(proteintransduction domain，PTD)、果蝇触角蛋白同源结构域(ANTP)和单纯疱疹病毒(HSV)VP22蛋白的蛋白转导序列。特别是具有序列：YGRKKRRQRRR(SEQ ID NO：1)或其功能性片段的PTD。 

本发明融合蛋白中的人酪氨酸羟化酶催化区域优选具有下述序列(THc)：LLSGVRQVSEDVRSPAGPKVPWFPRKVSELDKCHHLVTKFDPDLDLDHPGFSDQVYRQRRKLIAEIAFQYRHGDPIPRVEYTAEEIATWKEVYTTLKGLYATHACGEHLEAFALLERFSGYREDNIPQLEDVSRFLKERTGFQLRPVAGLLSARDFLASLAFRVFQCTQYIRHASSPMHSPEPDCCHELLGHVPMLADRTFAQFSQDIGLASLGASDEEIEKLSTLSWFTVEFGLCKQNGEVKAYGAGLLSSYGELLHCLSEEPEIRAFDPEAAAVQPYQDQTYQSVYFVSESFSDAKDKLRSYASRIQRPFSVKFDPYTLAIDVLDSPQAVRRSLEGVQDELDTLAHALSAIG(SEQ ID NO：2)或其功能性片段。 

更优选的，本发明的融合蛋白具有下述序列：YGRKKRRQRRREFLLSGVRQVSEDVRSPAGPKVPWFPRKVSELDKCHHLVTKFDPDLDLDHPGFSDQVYRQRRKLIAEIAFQYRHGDPIPRVEYTAEEIATWKEVYTTLKGLYATHACGEHLEAFALLERFSGYREDNIPQLEDVSRFLKERTGFQLRPVAGLLSARDFLASLAFRVFQCTQYIRHASSPMHSPEPDCCHELLGHVPMLADRTFAQFSQDIGLASLGASDEEIEKLSTLSWFTVEFGLCKQNGEVKAYGAGLLSSYGELLHCLSEEPEIRAFDPEAAAVQPYQDQTYQSVYFVSESFSDAKDKLRSYASRIQRPFSVKFDPYTLAIDVLDSPQAVRRSLEGVQDELDTLAHALSAIG(SEQ ID NO：3)，其中： 

1)残基1-11为HIV-1的反式激活蛋白的47-57位肽； 

2)残基12-14为连接序列； 

3)残基15-367为THc序列。