[发明专利]包含VDUP1蛋白或其编码基因的用于将造血干细胞分化为天然杀伤细胞的试剂，及利用该试剂将造血干细胞分化为天然杀伤细胞的方法

说明书

技术领域

本发明涉及将造血干细胞分化为天然杀伤细胞的试剂，及利用该试剂将造血干细胞分化为天然杀伤细胞的方法，更明确地涉及，将造血干细胞分化为天然杀伤细胞的试剂，所述试剂含有作为有效成分的VDUP1(上调蛋白1的维生素D3)或其编码基因或调节VDUP1的维生素D3，以及利用该试剂将HSCs分化为NK细胞的方法。

背景技术

造血干细胞，即干细胞中的一种，能够通过任何机会分化为各种血液成分(红细胞(red blood cell或erythrocyte)，白细胞(white bloodcell或leukocyte)，血小板和淋巴细胞)，且在体内不断地自体再生并分化为免疫细胞。在形成免疫系统的细胞中，天然杀伤细胞(下文中称为“NK细胞”)能够杀伤非特异性肿瘤细胞。NK细胞的细胞毒性不仅提供利用淋巴因子激活的杀伤细胞(LAK)和肿瘤渗透淋巴细胞(TIL)处理实体肿瘤的线索，还适用于通过供体淋巴细胞输注进行的免疫疗法(J.Immunol.，36：3910-3915，1986；Hematologia，84：1110-1149，1999)，从而开发一种新型的对付骨髓移植或器官移植后排斥反应的细胞疗法。根据近期的报告，NK细胞有缺陷的分化和活化在多种疾病中有所涉及，所述疾病包括乳腺癌(Breast Cancer Res.Treat.，66：255-263，2003)，黑素瘤(MelanomaRes.，13：349-356，2003)，肺癌(Lung Cancer，35：23-18，2002)，等，并且因此，产生了利用NK细胞治疗这些疾病的新型细胞疗法。

NK细胞来源于骨髓中的造血干细胞。NK细胞由HSCs的发育由若干步骤组成，尚未完全定义这些步骤。

上调蛋白1的维生素D3(VDUP1)最初报告是通过HL-60白血病细胞中的维生素D3进行上调的(Biochem.Biophys.Acta，1219：26-32，1994)。近期还有报告指出VDUP1与硫氧还蛋白(Trx)相互作用，从而抑制Trx的活性并阻断Trx与其它因子的相互作用(J.Biol.Chem.，274：21645-21650，1999，J.Immunol.，164：6287-6295，2000)。换句话说，VDUP1在Trx调节细胞内氧化/还原中充当负控制剂，从而使该细胞对氧化应力更加敏感。另外，报道指出VDUP1反义DNA在鼠黑素瘤细胞中的黑色素合成和肿瘤发生中有所涉及(Immunology Letters，86：235-247，2003)，且通过抑制肿瘤细胞中细胞周期而具有抗癌活性。实际上，VDUP1在肿瘤组织中的表达与在正常细胞中的表达相比有所下降。VDUP1的表达在免疫细胞中是显性的，但是其在免疫细胞中全部的作用尚未知。

因此，本发明人证实了VDUP1通过调节VDUP1基因敲除小鼠中IL-2受体β(CD122)而参与NK细胞体外分化，，还证实了上调VDUP1的维生素D3也调节NK细胞的分化。并且，本发明人通过证实利用基因调节分化为NK细胞的可能性完成了本发明，其中所述NK细胞具有细胞毒性和控制免疫系统进行细胞分化及进一步进行癌症治疗的能力。

发明内容

技术问题

本发明证实VDUP1(上调蛋白1的维生素D3)即调节干细胞分化为NK细胞的基因，的功能，并且因此提供用于NK细胞分化的试剂，所述试剂含有VDUP1或编码该蛋白质的基因和调节VDUP1基因的维生素D3，以及利用该试剂的分化方法。

技术方案

本发明提供用于NK细胞分化的试剂，该试剂含有作为有效成分的VDUP1蛋白或其编码基因。

本发明还提供用于NK细胞分化的试剂，特征在于含有由SEQ ID NO：1所代表的VDUP1蛋白。

本发明提供用于NK细胞分化的试剂，特征在于含有由SEQ ID NO：2所代表的VDUP1基因。

本发明提供用于NK细胞分化的试剂，特征在于通过向非病毒载体或病毒载体中引入所述基因制备而成。

本发明提供用于NK细胞分化的试剂，其中所述非病毒载体是在图18中存在的pFLAGmVDUP1。

本发明提供用于NK细胞分化的试剂，其包括作为有效成分的维生素D3。

本发明提供用于NK细胞分化的试剂，其特征为通过维生素D3调节VDUP1基因。

本发明提供用于NK细胞分化的试剂，特征在于可用于癌症的治疗。