[发明专利]抗体文库筛选的方法

说明书

技术领域

本发明涉及筛选分子文库的方法，尤其是噬菌体展示文库，以鉴 别或选择其中一种或多种成员，所述成员是一种或多种靶体的候选结 合伴侣(partners)，尤其是细胞表面分子的候选的结合伴侣。本发明 进一步涉及到从其它文库成员中分离所述靶体的备选结合伴侣的经 改进的方法。

背景技术

噬菌体抗体展示技术被证明是一项非常适于抗体的筛选和选择 以确定目标抗原的技术(综述见Hoogenboom等人，1998， Immunotechnol.，4：1-20)。大量的方案依赖于可以获得纯化和/或重组 的抗原，所述抗原在被固定至固体载体上之后被筛选。

探测细胞表面的分化和鉴别某些细胞类型或疾病相关的状态特 有的细胞表面分子的结合伴侣是开发标靶向治疗的最有前途的方法。 然而，对这些结合伴侣的鉴别往往是挑战性的实验。

鉴别细胞表面分子的结合伴侣的常规方法是基于将细胞在含有 复合的噬菌体展示单链Fv(scFv)文库的悬浮液或培养基中孵育，随 后进行几次清洗(通常5次或更多)以及对结合的噬菌体的酸或碱洗 脱(例子见Hoogenboom等人，1999，Eur.J.Biochem.，260：774-784； Ridgeway等人，1999，Cancer Reserch，59：2718-2723；Wong等人.， 2001，Cancer Immunol.Immunother.，50：93-101)。在这之前，通常通 过对不相关的细胞类型进行阴性淘洗除去不相关的结合伴侣。最近更 加改进的和更加高通量的方法是将所述细胞固定至硝化纤维素薄膜 之后，用噬菌体展示文库筛选细胞(Radosevic等人，2003，J.Immunol. Methods，272：219-233)。

使用噬菌体展示文库对细胞表面结合蛋白的筛选、选择和分类的 常规方法的可选择的和节省时间的方法已被Giordano等人阐述，且被 称为BRASIL方法(Biopanning and Rapid Analysis of Selective Interactive Ligands，2001，Nature Med.，11：1249-1253)。这个方法基 于对游离的和细胞结合的噬菌体的单步骤的有机相分离，相对于所述 常规方法的清洗步骤(即自由噬菌体从细胞中清洗除去的步骤)而言， 该方法的清洗步骤具有的本质优点是避免了密集劳动、效率低以及造 成细胞和潜在配体流失。

发明内容

令人惊奇地，人们现在发现，与BRASIL方法教导的相反，筛选、 选择和鉴别细胞表面分子结合伴侣的显著改进的方法涉及在有机相 分离之前，使所述细胞至少经受一次清洗步骤。与如上所述的常规的 清洗和洗脱方法相比，所述方法还表现出显著的进步。

概括而言，本发明因而提供一种筛选分子文库以鉴别或选择其中 一种或多种成员的方法，所述成员是一种或多种靶体的候选的结合伴 侣，所述方法包括：

(a)用一种或多种靶体接触表达文库；

(b)使所述靶体经受至少一次清洗的步骤；

(c)通过有机相的分离，从未结合的所述表达文库成员中分离出 与表达文库的一种或多种成员结合的所述靶体，从而从其他文库成员 中分离出所述靶体的候选的结合伴侣。

可选择地被认为，本发明提供一种在表达文库中从其他未结合的 文库成员中分离出与靶体结合的候选结合伴侣的方法，该方法包括在 此限定的步骤(a)至(c)。